染色的原理和临床意义:在同一张涂片上进行两种酯酶染色的方法称为酯酶双染色。多数采用一种特异性酯酶加一种非特异性酯酶染色,常用的有α-醋酸萘酚酯酶与氯乙酸AS-D萘酚酯酶双染色、α-丁酸萘酚酯酶与氯乙酸AS-D萘酚酯酶双染色等。反应的原理基本上同各自的染色原理,同一张涂片上的细胞要分别在两种不同的基质液中作用一定时间,较后复染、显微镜观察。酯酶双染色可同时观察两种不同的白血病细胞,因此在鉴别白血病类型方面明显优于单项染色。急性粒-单核细胞白血病 该染色法在急性粒-单核细胞白血病的同一张涂片上可分别出现α-NBE染色和NAS-DCE染色阳性反应的细胞,甚至少数病例在单个细胞内同时出现以上两种酯酶染色的双重阳性反应,因此酯酶双染色反应在急性粒-单核细胞白血病的诊断上具有独特价值。急性单核细胞白血病原、幼单核细胞POX染色多呈细小颗粒弱阳性反应。天津咨询糖原染色试剂盒厂家直销
糖原及粘液染色法注意事项:1、 糖原的固定要及时,而且标本要新鲜。2、如用无水酒精作糖原的固定剂,有它的弊病,因无水酒精渗透较慢,而且容易产生极化,(极化是糖原颗粒趋向于细胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果较佳,其配法如下:苦味酸饱和于95%酒精85ml40%甲醛 10ml冰醋酸 5ml3、各种试剂必须化学纯,亚硫酸钠须有浓厚气味,器皿必须洁净而干燥,染色缸亦是。4、如果Schiff氏试剂,在经过活性碳吸附漂白后不显无色,首先应考虑试剂中的偏重亚硫酸钠是否失效。如果偏重亚硫酸钠气味不浓,使用时可考虑适当的增加用量。其次考虑碱性品红本身,常常虽属同一生产厂家,但不同批号,其效果就可能不同,应特别引起注意。天津哪家提供糖原染色试剂盒服务电话取材必须新鲜,这一点对于从事细胞生物学研究尤为重要。
糖原染色(过碘酸-雪夫反应) 原理 多糖中乙二醇基 经过碘酸氧化成二醛基与无色品红结合, 形成紫红色化合物。沉积于含糖原的胞浆中。结果:胞浆中出现弥散状,颗粒状,块状红色为阳性。 无红色颗粒为阴性 _x000c_临床意义 1、正常血细胞的染色反应 粒系:原粒细胞糖原含量很低,随着细胞的分化成熟,糖原含 量逐增加,至成熟阶段糖原含量十分丰富。 淋巴细胞:糖原常凝聚成颗粒或块状。巨核细胞-血小板系统:PAS反应呈粗大的紫色颗粒或团块。 正常红系:阴性。对疾病诊断的意义白血病类型的鉴别: 急性粒细胞白血病:原始粒细胞呈阴性或弱阳性反应,以弥 散性为主; 急性淋巴细胞白血病原、幼淋巴细胞多呈粗颗粒、块状阳性反应。
染色的一般原则:因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用凋亡诱导处理的细胞做单阳对照,进行荧光补偿的调节。标记抗体常用荧光素 FITC,EGFP激发光:488nm发射光:525nm;使用面较广,价格便宜。PE激发光488nm 发射光575nm,此荧光的激发效率较佳,故此荧光得到的信号较强;检测某些弱表达的抗原,推荐使用此荧光素。价格较FITC昂贵。APC激发光633nm, 发射光660nm,在配有双激光的流式细胞仪上,此荧光染料可与7-AAD或PI共同使用来避开自带绿色荧光的样本。流式细胞仪相关试剂盒。通过显微镜对组织内的生物化学成分进行定性、定位、定量研究。
特殊染色方法选择应遵循:1、特异性高、传统或经典的染色方法;特异、传统/经典的一些染色法在特殊染色方法的选择中往往作为选择。如显示淀粉样物质。刚果红染色作为经典的方法,比天狼星红、甲基紫等其他方法都要实用。淀粉样物质(刚果红及天狼星红染色)。2、染色流程相对简便、染液易配制的染色方法;选择染色流程简便的方法,无论对于量较多的整批次染色,还是较少量的染色均能够节省时间、更为便捷。选择染液易配制的方法,对自配染液(尤其是保存较短的染液)是较为重要的选择,不容易造成因染液配制问题而影响染色结果。如显示弹性纤维。醛品红染色法无论是从染色流程,还是染液配制都要比铁苏木精、间苯二酚碱性品红等染色方法要简单方便、省时,同时阳性着染对比度也很明显。细胞核、染色体以及基因表达的研究。福建如何使用糖原染色试剂盒进货价
故PAS染色有助于三种急性白血病类型的鉴别。天津咨询糖原染色试剂盒厂家直销
注意事项:染色前:①切出的石蜡切片要好,不能有皱褶或者刀痕,切片不能太厚。②捞片时,较好一张玻片捞一个组织,组织较好位于玻片的中间,美观的同时也利于脱蜡(有时二甲苯的液面低于组织片的时候,达不到脱蜡的目的)。③石蜡切片脱蜡到水时,一定要注意组织切片脱蜡务必要彻底(脱蜡时间不能太少)以使脱蜡后的组织达到真正的“干净”。否则剩余的未脱干净的石蜡粘附在组织表面,在染色时染色液未能充分与组织接触,较终导致染色效果不佳,甚至染不上颜色。④在染色过程中较好不要在玻片上贴标签纸,以避免脱蜡时把标签纸也浸没,致使标签纸上的胶黏到玻片上,造成染色不佳。天津咨询糖原染色试剂盒厂家直销
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粘液染色法:粘液一般有以下几点特性:(1)对盐基性染料有亲合力,因此在HE染色中、切片上的粘液呈污秽蓝色。(2)对某种盐基性人工合成染料如硫堇或甲苯胺蓝有异染性。(3)遇醋酸发生沉淀,胃粘蛋白则除外。(4)溶于弱碱溶液。常用的粘液染色有以下几种:1、P.A.S染色法:操作方法同前,结果;中性粘液性物质,某些酸性粘液物质呈红色,核呈蓝色。2、AB/P.A.S染色法:该种方法的特点是能同时显示出酸性和中性粘液物质。操作方法:(1)切片常规脱蜡入水。(2)3%醋酸液洗2分钟,入1%阿利新兰醋酸液(PH2.5)10-20分钟。(3)蒸馏水洗。(4)按P.A.S染色程序。(5)苏木素淡染2-3分钟,水洗...