mRNA:是蛋白质合成(翻译)过程中的模版,蛋白质分子中氨基酸的排列顺序,就是由mRNA上每3个相邻的核苷酸形成的密码子的排列顺序决定的;tRNA:的作用是在蛋白质的合成过程中转运氨基酸,为蛋白质的合成提供原料;并可准确识别其所转运的氨基酸在mRNA上的密码子;rRNA:主要是和一些蛋白质组装成一类重要的细胞器——核糖体,而核糖体就是蛋白质合成的场所——“装配车间”。所以三种RNA的作用主要是参与蛋白质的生物合成。tRNA上的反密码当然应能识别mRNA上相应的、互补的密码,并与之配对。然而用提纯的tRNA来进行实验时,发现一种tRNA能够识别几种密码。例如,丙氨酸tRNA,其反密码为IGC(5′>3′),可以识别三种密码。rRNA与多种蛋白质分子共同构成**白体。**白体相当于“装配机”,能促使tRNA所携带的氨基酰基缩合成肽。**白体附着在mRNA上,并沿着mRNA长链的起始信号向终止信号移动。至于rRNA在蛋白质生物合成中的具体作用还不清楚。RNA定量方法与DNA定量相似。长沙正规RNA提取试剂直销厂家
RNA提取围绕DEPC的玄学。单纯高压过的蒸馏水或超纯水,基本可以视为无核酸酶活性等级的水。Thermo Fisher公司曾经做一项实验来说明这个问题。在PBS中加入不同浓度RNase A,高压或不高压,后溶解P-32标记RNA 探针。较后数据显示,除非原始的RNase A的浓度高达1 µg/ml,否则常规高压过的水,基本检测不出RNase A活性。当然,Thermo的科学家也很谨慎,说这个结论*适用于RNase A,不能推广到其他的RNase类型。不使用DEPC来处理RNA实验相关试剂和耗材,因为太费劲,而且DEPC还有毒性。相关的液体试剂,我会使用从公司购买的Nuclease-free的水来配制。没有很贵,一小瓶够用很久。很多时候买各种其他试剂,比如酶、siRNA等,也都会送这样的水。在耗材方面,直接使用大公司的离心管和吸头,根本不用担心核酸酶的问题。广州正规RNA提取试剂厂家RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯,需电泳检测。
与DNA不同,RNA一般为单链长分子,不形成双螺旋结构,但是很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。RNA的碱基配对规则基本和DNA相同,不过除了A-U、G-C配对外,G-U也可以配对。在细胞中,根据结构功能的不同,RNA主要分三类,即tRNA(转运RNA),rRNA(核糖体RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白质的模板,内容按照细胞核中的DNA所转录;tRNA是mRNA上碱基序列(即遗传密码子)的识别者和氨基酸的转运者;rRNA是组成核糖体的组分,是蛋白质合成的工作场所。
细胞RNA提取的方法:异丙醇主要用于沉淀RNA。取出EP管后可以见到侧壁沉淀,轻轻吸弃上清。向EP管中加入75%酒精洗涤沉淀,帮助分离剩余的有机试剂(剩余有机试剂过多会影响OD值和PCR反应),轻弹沉淀,使其浮在酒精,静置1-2min,让酒精充分接触沉淀,充分溶解有机试剂,然后4度离心5min。轻轻吸弃上清。将EP管再次放于离心机中瞬时离心,弃掉管壁残余液体。然后将EP管置于超净台中干燥5-10min.。注意RNA样品不要过于干燥,否则很难溶解。加入50ul DEPC处理水,震荡充分溶解沉淀。测量RNA浓度。将RNA保存于-80度。在实际RNA提取中,有几个提取原则:保证RNA一级结构的完整性。
核糖核酸RNA是以DNA的一条链为模板,以碱基互补配对原则,转录而形成的一条单链,主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达,是遗传信息传递过程中的桥梁。tRNA的功能是携带符合要求的氨基酸,以mRNA为模板,合成蛋白质。核糖核酸由至少几十个核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接而成的一类核酸,因含核糖而得名,简称RNA。RNA普遍存在于动物、植物、微生物及某些病菌和噬菌体内。RNA和蛋白质生物合成有密切的关系。RNA是以DNA的一条链为模板,以碱基互补配对原则,转录而形成的一条单链,主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达,是遗传信息向表型转化过程中的桥梁。在此过程中,转运RNA(Transfer RNA,tRNA)是携带与三联体密码子对应的氨基酸残基与正在进行翻译的mRNA结合,而后核糖体RNA(Ribosomal RNA,rRNA)将各个氨基酸残基通过肽键连接成肽链进而构成蛋白质分子。他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到较低程度。徐州北京RNA提取试剂
使用时一定要根据自己的实验需要购买**提取试剂盒, 如果不是**试剂盒。长沙正规RNA提取试剂直销厂家
rRNA是细胞内的一种基本RNA,与r蛋白一起构成蛋白质合成的场所—核糖体。随着rRNA基因序列越来越了解,其在生物研究中也的得到了更普遍的应用,主要表现在生物进化研究和分子流行病研究。(1)rRNA在生物进化上的研究。rRNA具有高度保守性,且普遍存在于各种生物中,rRNA提供了足够的序列信息。现在还可用于在细菌分类、细菌鉴定等方面。(2)rRNA在分子流行病上的研究。目前,人们已经把rRNA在进化上的普遍差异应用到了流行病学研究方面,通过对不同细菌进行鉴定分类,从而明确病因,追踪传染源,进一步控制及预防疾病。长沙正规RNA提取试剂直销厂家
RNA提取:主要试剂Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞,压制细胞释放出的核酸酶。1.Trizol试剂含有苯酚,具有毒性和刺激性,注重操作。2.RNase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉,注重配带手套,样品尽可能盖严。3.细胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全会降低较后得率,因为一部分RNA会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质(结缔组织和骨除外)。在清洗和裂解细胞时较好在低温下操作,防止在操作过程中释放的内源RNase降解了RNA。4.酵母和一些细菌由于细胞壁的特别结构,可以加入Trizol试剂同时加入无RNase的玻璃珠并剧...