RNA试剂盒:用于各种植物、动物、微生物的RNA提取,在每个试剂盒里都有一份说明使用说明书。实验者只需要按照说明书上的步骤操作即可。使用时无需配制其它试剂,非常方便,适合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、纯度高,可用于分子生物学后实验。但较好的试剂盒价格比较贵,在实验室可以根据自己的实验需要来定夺试剂盒的使用。注意事项所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品,操作过程要小心,带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯,需电泳检测。移去水相后,用乙醇可从中间相沉淀得到DNA,加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。深圳正规RNA提取试剂
酵母RNA的提取方法:稀碱法是属化学破壁法,其方法是在一定碱浓度下,使构成细胞壁的蛋白质、脂肪及糖的化合物得到水解,从而破坏细胞壁,此法对碱的浓度及提取温 度要求比较严格,碱的浓度不可过浓,应控制在 1%,并且对提取温度也有一定的要求,提取时间短。因为在过分剧烈的条件下,容易使核糖核酸分子内的酯键断裂,使核糖核酸降解而影响收得率。酵母菌作为重要的模式生物,是遗传学和分子生物学的重要研究材料。由于酵母菌的细胞壁成分复杂,且较原核生物厚,难于破碎,因此酵母菌总RNA的抽提纯化要比原核生物总RNA的抽提纯化困难的多。如何有效地破碎细胞壁并保证RNA的完整性,是获得高质量酵母菌总RNA的关键问题。总RNA的提取方法还有很多,如Trizol法、异硫氰酸胍法、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、尿素法、 十二烷基硫酸钠(SDS)法、热硼酸盐法等,这些方法 各有优缺点,不同的方法适用于不同类型的材料。深圳正规RNA提取试剂能迅速破碎细胞,压制细胞释放出的核酸酶。
对RNA的科学研究,首先要从植物或者动物等组织中提取出合格的RNA。在实际RNA提取中,有几个提取原则:1、保证RNA一级结构的完整性;2、提取的RNA样品中不应存在对酶存在压制作用的有机溶剂及过高浓度的金属离子;3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到较低程度;4、排除其它核酸分子(DNA)的污染。常用RNA提取方法有:1TRIzol法;2TRIzol+过柱法;3CTAB+过柱法;4试剂盒法。RNA提取试剂盒Biomarker Plant Total RNA Isolation Kit (Polysaccharides&Polyphenolics–rich),能从植物组织,特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织(如成熟水稻叶片,棉花叶片,拟南芥种子,香蕉,马铃薯块茎,苹果,西瓜果肉,猕猴桃,梨,月季等)中快速提取总RNA,同时可以处理大量不同样品。
RNA提取试剂盒原理:该EpiQuik™总RNA提取试剂盒提供了一种快速,简单,经济有效的方法,可从全血,哺乳动物细胞,细菌细胞和菌类细胞中分离总RNA。优化的洗涤剂和离液盐用于裂解细胞并灭活核糖核酸酶。专门的高盐缓冲系统允许RNA物质基团结合到旋转柱的玻璃纤维基质上,同时使污染物通过柱被有效地洗去。纯的RNA用RE缓冲液洗脱,不用酚提取或醇沉淀。 RNA提取试剂盒特点:1、快速程序在25-40分钟内提供高质量的总RNA。2、即用型RNA,可在绝大多数下游应用,例如RT-PCR,cDNA合成,Northern Blotting,Differential display,Primer Extension, mRNA selection。3、适用样品:全血,哺乳动物细胞,细菌细胞和菌类细胞(样品起始量:300μl全血,10 ^ 7个哺乳动物细胞,10 ^ 9个细菌细胞和10 ^ 8个菌类细胞。总共可以使用该试剂盒进行50次标准提取。总RNA的产量可达30μg。产量可能因样品类型而异。)带口罩、帽子,屏住呼吸、不说话,带乳胶手套并要时常更换。
经典Trizol法并不能获得总RNA:这个事实可能会刷不少新手甚至老手的三观,但确有实验支持:经典Trizol法会选择性丢失低GC比的miRNA。这一点,源自一则作者自撤稿的故事。V. Narry Kim是韩国鼎鼎大名的美女科学家,专做RNA相关的研究,包括miRNA。几年前她们组发现一个奇怪的“现象”,即贴壁细胞在消化之后,会有一些miRNA的丰度突然降低,看起来好像是被快速“降解”掉了,并据此写了一篇文章发到Molecular Cell上。但很快她们就发现,这个“现象”难以重复:如果用Trizol做实验,就一定是阳性结果,而用试剂盒提RNA,就重复不出来。难道是号称能提总RNA的Trizol方案出了问题?确实如此。经进一步实验后发现,经典的Trizol方案会使得低GC比的miRNA丢失。很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。深圳正规RNA提取试剂厂家
加入氯仿离心后,裂解液分层成水相和有机相。深圳正规RNA提取试剂
环状RNA是一类产生于RNA剪切过程中的封闭唤醒RNA分子,主要由外显子和(或)内含子构成。环状RNA参与了复杂的RNA-RNA的相互作用网络,在基因转录后调控中发挥作用;环状RNA可直接与蛋白质结合,也可通过RNA介导间接与蛋白质发生关联,影响蛋白质功能;部分环状RNA具有翻译功能。研究发现,环状RNA与一些疾病的发生、发展具有直接关联,为一些疾病发病机制提供了新思路,除此之外,环状RNA 在与衰老、炎症等生理、病理现象方面也有重大应用。深圳正规RNA提取试剂
RNA提取:主要试剂Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞,压制细胞释放出的核酸酶。1.Trizol试剂含有苯酚,具有毒性和刺激性,注重操作。2.RNase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉,注重配带手套,样品尽可能盖严。3.细胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全会降低较后得率,因为一部分RNA会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质(结缔组织和骨除外)。在清洗和裂解细胞时较好在低温下操作,防止在操作过程中释放的内源RNase降解了RNA。4.酵母和一些细菌由于细胞壁的特别结构,可以加入Trizol试剂同时加入无RNase的玻璃珠并剧...