在这项新的研究中,经过基因修饰的外泌体(被称作iExosome)能够运送特异性地靶向KRAS突变基因的小RNA分子,从而导致胰腺病模式小鼠病情缓解,增加它们的总存活率。这些研究人员采用了一种被称作RNA干扰(RNAi)的靶向方法:利用这些天然的纳米颗粒(即外泌体)运送小干扰RNA(siRNA)或短发夹RNA(shRNA)分子来靶向胰腺病细胞中的KRAS突变基因,从而影响多种胰腺病模型的一些病症负荷和存活。他们证实外泌体能够作为一种高效的RNAi载体发挥作用,这是因为这些纳米大小的囊泡(即外泌体)轻松地在体内迁移和进入靶细胞(包括病细胞)中。外泌体提取:可分离到大小相近的囊泡颗粒。开封正规外泌体提取试剂生产厂家
CD47是信号调节蛋白α(SIRPα,也称为CD172a)的配体,CD47-SIRPα间的结合能够发出“不要吃我”的信号,从而压制吞噬作用。病基因RAS能够促进胰腺病细胞增殖,增强胞饮作用从而促进一些病症细胞摄取外泌体。合成纳米颗粒对细胞有一定毒性作用,但使用外泌体能够较小化对细胞的毒性。研究人员发现,CD47和病基因KRAS驱动的胞饮作用都会压制外泌体被循环系统的清理,并增强胰腺病细胞对外泌体的特异性。所以,外泌体的这种特性增强了它们通过递送RNAi来特异性靶向胰腺病中的KRAS的能力,并且使用外泌体作为单一靶向剂显着改善了所有实验PDAC小鼠模型的总生存期。昆明正规外泌体提取试剂哪家便宜超滤离心法简单高效,且不影响外泌体的生物活性,是提取细胞外泌体的一种新方法。
外泌体的提取分离:1、PEG-base沉淀法。聚乙二醇(PEG)可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀,早先应用于从血清等样本中收集病毒,现在也被用来沉淀外泌体,其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题:比如纯度和回收率低,杂蛋白较多(假阳性),颗粒大小不均一,产生难以去除的聚合物,机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等,因此发表文章时易受质疑。2、试剂盒提取。近几年来,市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒,有的是通过特殊设计的过滤器过滤掉杂质成分,有的则采用空间排阻色谱法(SEC)进行分离纯化,也有的则利用化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。这些试剂盒不需要特殊设备,随着产品不断更新换代,提取效率和纯化效果逐渐提高,因而逐渐取代超速离心法并推广开来。有些试剂盒操作简便,不用超速离心,同时可获得高纯度和高回收率的外泌体。
所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡,参与细胞间通讯,对外泌体的研究兴趣日益增长,无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。1983年,外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现,1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。外泌体提取:根据外泌体的大小,从蛋白质和其他大分子中分离外泌体。
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。李记生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒,组分经过优化处理,适用于细胞培养上清液、血清、血浆、尿液及其他体液(脑脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌体提取,并搭配纯化过滤装置,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒。注意事项:1.对于待测样品粘度过大时,可将样本用4℃预冷的1×PBS缓冲液进行等体积稀释处理。2.当血清、血浆、唾液等样品收获的外泌体浓度较高,收获的外泌体颗粒无法通过EPF柱纯化时,可用4℃预冷的1×PBS进行稀释后再通过EPF柱离心。3.针对外泌体标志蛋白(CD63,CD9,CD81等)进行Westernblot检测,可以鉴定所提的外泌体。通过超速离心(120000g/分钟)20小时以上才能获得足够的外泌体量。外泌体的提取方法学规范、统一定量及鉴定等。重庆外泌体提取试剂进货价
外泌体的提取方法:多聚物沉淀法。开封正规外泌体提取试剂生产厂家
外泌体是一种存在于细胞外的多囊泡体,可通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成多泡内涵体,内涵体与细胞膜融合后释放其中的小囊泡。外泌体的直径在40-110nm之间,其中包含RNA、蛋白质、microRNA等多种物质,存在于血液、唾液、尿液、脑脊液和母乳等多种体液中。外泌体从发现至今已有30多年的历史,虽然较初被认为可能是细胞的“垃圾”,所以才被排出来,但是近年来研究表明外泌体具有功能活性并可进行细胞间信息传递。如今,研究已经发现外泌体在抗原提呈细胞中呈递抗原程中、一些病症细胞发生的发展、神经细胞信号转导过程中都发挥着重要作用。利用化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。开封正规外泌体提取试剂生产厂家
外泌体的提取方法学规范、统一定量及鉴定等。关于外泌体的提取有超速离心、试剂盒、超滤法、蔗糖密度梯度离心等,然而各种方法均有其利弊。超速离心法是目前外泌体相关文章中的主流方法,由于离心步骤繁琐,费事费力,而且步骤多导致实验中容易污染,且损耗量大,使得较终回收的外泌体不稳定。而且对于抽提细胞上清来说,更是极为不请便,试想用提取300ml的上清需要6个50ml离心管,无论是过滤还是后续的每一步的离心去沉淀,都具有操作极其不便的缺点,总之非常麻烦。而超滤法存在外泌体会堵塞膜孔,造成浓缩效率低,浓缩管重复利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌体还可能会粘连成团,造成损失及较后的数据有误差,对于后续实验也有影响无法...