细胞转染简介:转染 ,是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种细菌介导的转染技术。理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。细菌介导的转染技术,是目前转染效率较高的方法,同时具有细胞毒性很低的优势。但是,细菌转染方法的准备程序复杂,常常对细胞类型有很强的选择性,在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法,则各有其特点。震荡后将试剂放在-20摄氏度保存,使用前还需震荡。厦门细胞高效转染试剂厂家推荐
如何高效率实现细胞转染:瞬时转染与稳定转染常规转染技术根据基因表达时间的长短可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(很长转染)。瞬时转染的细胞中,外源基因得以表达但它们并不会整合到细胞的基因组中,也就不会被复制。细胞中瞬时转染的外源基因表达时间有限,通常*持续几天,直到外源基因在细胞分裂过程中因各种因素丢失为止。在瞬时转染质粒中往往都含有一个报告基因,来指示细胞中目标基因是否存在,这样的报告基因一般可以在转染后一两天内检测到。长沙细胞高效转染试剂单价阳离子脂质体转染试剂脂质转染试剂,以其适用宿主范围广。
细胞转染那些事儿:1. 选择传代次数较低并处于对数生长期的细胞进行转染。对大多数细胞而言,均需要在转染当天或前现在铺板,第二天上午进行转染,48h后收集细胞进行功能检测。对于原代细胞,可用促有丝分裂刺激物进行细胞活化。2.对于贴壁细胞,一般要求在转染前一日,用胰酶处理为单细胞悬液,重新接种于培养皿或瓶,较好在转染前4小时换一次新鲜培养液。3.支原体污染会严重降低细胞转染的效率,且支原体不会像细菌污染那么明显,因而转染前可用环丙沙星处理细胞以除去支原体。4.细胞转染时需要一定的细胞密度,以70-90%(贴壁细胞)或2×106-4×106细胞/ml(悬浮细胞)为宜。
细胞转染的注意事项:物品(PS)物品,比如青霉素和链霉素,是影响转染的培养基添加物。这些物品一般对于真核细胞无毒,但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性,使物品可以进入细胞。这降低了细胞的活性,导致转染效率低。所以,在转染培养基中不能使用物品,甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用物品。这样,在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染,不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素,ICIN选择性物品的竞争性克制剂。另外,为了保证无血清培养基中细胞的健康生长,使用比含血清培养基更少的物品量。能与核酸的磷酸根通过静电作用,将DNA分子包裹入内。
细胞转染,你至少要掌握以下几点:主要有下面几种方法::化学法:磷酸钙法、DEAE-右旋糖苷法、阳离子脂质体法;物理法:电穿孔法、显微注射法、颗粒传递法;细菌介导法:逆转录细菌、腺细菌A. 阳离子脂质体法:带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。特点:简单通用,适用性广,转染效率高,重复性好,但转染时需除血清,转染效率随细胞类型变化大。由于脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会远大于悬浮细胞,所以贴壁比悬浮转染效率要高。悬浮细胞建议使用电穿孔法。B. 电穿孔法:利用高压电脉冲对细胞膜的干扰,使其形成利于核酸进入的微孔。细胞易于生长到高密度并合成更多蛋白。成都正规细胞高效转染试剂哪里买
脂质体转染法阳离子脂质体表面带正电荷。厦门细胞高效转染试剂厂家推荐
如何高效率实现细胞转染:转化、转染、转导几个名词是从事生命科学研究的初学者经常碰到的,也是让人容易混淆的。他们之间有什么区别和联系呢:转化(transformation)指将质粒或其它外源DNA导入处于感受态的宿主细胞(原核生物),并使宿主细胞获得新的表型的过程。转导(transduction)由噬菌体或细胞细菌介导的遗传信息转移过程称转导或传染(Infection)。转染(transfection)是指真核细胞主动或者被动导入外源DNA片段而获得新表型的过程。对于真核生物,转染就是原核生物中转化的同义词。转染技术转染是将外源遗传物质导入真核细胞的过程,是细胞和分子生物学研究的重要工具。在现生命可续研究中,大部分的工作是利用基因功能研究来探索生命过程,如何将目的基因导入细胞内是科学实验过程中不可缺少的实验技术,而细胞转染是完成这一过程的必需步骤。厦门细胞高效转染试剂厂家推荐
转染技术:国际上推出了一些阳离子聚合物基因转染技术,以其适用宿主范围广,操作简便,对细胞毒性小,转染效率高受到研究者们的青睐。其中树枝状聚合物(Dendrimers)和聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)的转染性能较佳,但树枝状聚合物的结构不易于进一步改性,且其合成工艺复杂。聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔二个碳个原子,即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”(protonsponge)体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞,其效果好于脂质聚酰胺,经进一步的改性后,其转染性能好于树枝状聚...