总RNA提取试剂是广谱型总RNA提取试剂。实验操作快速方便,颜色鲜明,便于分层。本试剂适用范围普遍,可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。样品在总RNA提取试剂中被充分裂解的同时能够较大限度地保证RNA的完整性。在加入氯仿离心后,溶液会分成三层:上层无色水相、中间层和下层红色有机相,RNA分布在上清层中。收集上清层后,经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好,无蛋白和DNA污染,可用于各种分子生物学常规实验,如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、Northernblot、DotBlot、体外翻译等。RNA提取:无论是从细胞、血液、还是组织等高难度样本提取RNA。金华正规RNA提取试剂哪里买
植物RNA提取:植物组织中,富含酚类化合物,或富含多糖,或含有某些尚无法确定的次级代谢产物,或RNase的活性较高。这些物质在细胞裂解后与RNA紧密结合形成难溶复合物或者胶状沉淀,很难将其去除。所以我们在提取植物组织时,要选取针对植物的试剂盒,试剂盒里的裂解液能有效解决多酚易氧化、多糖化合物与核酸分离等难题。1、植物的果皮、果肉、种子、叶片等要在研钵中充分研磨,研磨过程中液氮要及时补充,避免样品融化,研磨后的样品应迅速加入裂解液中震荡混匀,避免RNA降解。2、像水稻及小麦叶片等富含纤维的样本,则应适当减少提取用量,否则组织研磨及裂解不彻底,会使提取的RNA产量较低。3、含水分较多的植物组织例如石榴果实、西瓜果实、桃子果实等则应当适当提高样本量(可选100~200mg)。4、植物组织,如植物叶片、根茎、坚硬的果实等材料一般建议使用液氮在研钵中彻底研钵成份,再继续进行提取步骤。常规的组织匀浆机对植物组织的匀浆效果可能不佳,一般不建议使用。石家庄RNA提取试剂厂家直销总RNA提取试剂试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。
RNA提取浓度不高或质量不佳原因及解决办法:1、RNA降解:可能是提取样本本身降解,或者是在提取过程中导致的降级;应当尽可能使用新鲜样本进行RNA提取,采集的样本应当及时置于液氮或者-80℃冰箱冻存,并减少反复冻融。在RNA提取过程中应当使用RNase/DNasefree的吸头、离心管及其他材料,提取过程尽可能的快,提取后的RNA应置于冰盒上并及时放于-80冻存。如提取后的RNA需要进行凝胶电泳检测,则应提取好后立刻进行电泳,电泳缓冲液应更换新配制的。2、盐及有机溶剂残留:提取试剂中含有酚及胍盐,洗涤液中含有乙醇,在提取过程中裂解液吸弃不彻底,洗液没有充分晾干导致的,残留的盐及有机溶剂对后续的逆转录和PCR均存在不同程度的压制作用,因此在提取过程中应充分去除组织裂解液,洗涤时应充分,使管壁四周均能被洗涤到,另外管子空离和吹风是必须的步骤,会进一步降低有机物残留。
提取RNA的详细步骤:首先,将研钵晾干够,倒入1/3体积的液氮,加入0.2g均质的植物材料,充分研磨后转入一个含有300微升GMT的1.5ml的离心管中,摇匀。然后,加入30微升2mol/lNaAc进行摇匀,加入300微升酸酚摇匀,加入100微升的氯仿摇匀。然后,在四摄氏度12000r/min下离心二十分钟,吸取上清液的3/4,加入等体积的异丙醇,于冰上放置十五分钟。然后,在四摄氏度12000r/min下离心十分钟,将沉淀悬浮于含100微升的4mol/lLiCl小试管中,于-20摄氏度下放置过夜。然后,在4摄氏度13000r/min下离心10-15min,将沉淀溶于0.4mlDEPC处理水中,加入1/2体积氯仿和1/2体积酸酚,摇匀,进行抽提,在4摄氏度13000r/min下离心五分钟。将上清液中加入等体积的氯仿摇匀,进行抽提,在四摄氏度13000r/min下离心五分钟,上清液中加入1/10体积3mol/lNaAc和两倍体积的午睡乙醇与-20摄氏度放置一小时。排除其它核酸分子(DNA)的污染。
动物细胞RNA提取:1、悬浮细胞:可直接离心后弃掉培养基,用无菌PBS清洗1~2遍后,再用适量PBS悬浮起来,然后再加入裂解液进行裂解。千万不要完全弃掉液体后,往沉淀细胞里直接加入裂解液,这样会使外表层的细胞裂解后释放的组蛋白包裹粘附在沉淀细胞外侧,从而限制沉淀内部的细胞与裂解液的接触,从而导致细胞裂解不彻底,降低RNA得率。2、半贴壁或贴壁不紧的细胞:弃掉培养基后,用PBS洗1~2次,然后直接吸取适量PBS用吸管或者泵吹打培养皿,把细胞吹下来,转移到无RNA酶的EP管中,加裂解液进行提取。3、贴壁细胞:需要先用胰酶消化,然后收集到无RNA酶的EP管中,离心去其上清,用PBS洗1~2次,去除多余的胰酶,以适量PBS重悬后继续进行提取步骤。RNA提取试剂注意事项:为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。重庆RNA提取试剂哪家便宜
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超快速多糖多酚植物RNA提取试剂盒:无DNA污染,可直接反转录,荧光定量,不会出现洗脱液含络合Mg离子成分,压制后续PCR反应的情况。本试剂盒提取的RNA可直接用于对前期RNA提取质量非常高的后续实验,如转录组RNA测序,制作基因芯片,荧光定量PCR,核酸杂交,反转录等所有后续实验。一个样十多分钟搞定!具有多糖多酚植物RNA提取试剂盒已普及到全国各大农业大学,农科院,植物所等相关院校单位,包括中国农业大学,中国农业科学院生物技术所,作物所,蔬菜所,多糖多酚植物RNA提取试剂盒由华越洋自主研发生产,博取众家之长,根据多年来市场反馈不断进行技术升级和改良得来。具有操作步骤少,实验快捷,RNA产量纯度高,充分满足后续实验要求的需要,适用提取样品普遍等特点。产量:每100mg样品提取的RNA平均值在20-50ug不等。纯度:OD值一般在1.9以上。得到的RNA无DNA污染,可直接用于反转录,实时荧光定量PCR(尤其对RNA溶液中DNA非常敏感)等所有后续实验。金华正规RNA提取试剂哪里买
RNA提取:主要试剂Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞,压制细胞释放出的核酸酶。1.Trizol试剂含有苯酚,具有毒性和刺激性,注重操作。2.RNase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉,注重配带手套,样品尽可能盖严。3.细胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全会降低较后得率,因为一部分RNA会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质(结缔组织和骨除外)。在清洗和裂解细胞时较好在低温下操作,防止在操作过程中释放的内源RNase降解了RNA。4.酵母和一些细菌由于细胞壁的特别结构,可以加入Trizol试剂同时加入无RNase的玻璃珠并剧...