近年来,随着外泌体研究的不断深入,它的应用已经涉及一些病症治病领域、医学基础和免疫领域、寄生虫领域;临床研究上已涉及心血管系统、内分泌代谢系统等。外泌体来源及内含物。几乎所有类型的细胞都可以分泌外泌体,同时外泌体也普遍存在于体液中,包括血液、眼泪、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究发现外泌体中富含核酸(microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等)、蛋白、胆固醇等。外泌体的表面marker主要有CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP27等。外泌体鉴定。目前对于外泌体的鉴定主要有四种方法:透射电子显微镜(TEM)、Nanosight、WesternBlot、流式细胞术。外泌体提取:回收率不稳定(可能与转子类型有关),纯度也受到质疑。郑州正规外泌体提取试剂单价
在无菌条件下提取人体体液,并用PBS缓冲液进行稀释,然后通过离心筛选初步去除体液中的细胞成分和细胞碎片,制成体液样本备用;体液样本纯化:通过过滤膜对上述体液样本进行过滤,进一步去除体液中的细胞残片及其他杂质,静置10~15分钟,留取沉淀物备用;外泌体提取:将上述沉淀物用PBS缓冲液进行悬浮,使外泌体悬浮于液体上层,然后用无菌针管吸取上层含有外泌体的液体,置于80℃储存备用。此提取方法条件复杂,成本高,专利申请利用静置不太可能把外泌体沉降下来;根据外泌体表面的特异生物化学特性通过提取试剂的特异配方把外泌体从水相中沉降下来。不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能,可作为疾病诊断的生物标志物。开封外泌体提取试剂单价外泌体(Exosome)发现于1986年,是一种直径约30~100nm的双层膜囊泡状结构小体。
在这项新的研究中,经过基因修饰的外泌体(被称作iExosome)能够运送特异性地靶向KRAS突变基因的小RNA分子,从而导致胰腺病模式小鼠病情缓解,增加它们的总存活率。这些研究人员采用了一种被称作RNA干扰(RNAi)的靶向方法:利用这些天然的纳米颗粒(即外泌体)运送小干扰RNA(siRNA)或短发夹RNA(shRNA)分子来靶向胰腺病细胞中的KRAS突变基因,从而影响多种胰腺病模型的一些病症负荷和存活。他们证实外泌体能够作为一种高效的RNAi载体发挥作用,这是因为这些纳米大小的囊泡(即外泌体)轻松地在体内迁移和进入靶细胞(包括病细胞)中。
外泌体是一种存在于细胞外的多囊泡体,可通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成多泡内涵体,内涵体与细胞膜融合后释放其中的小囊泡。外泌体的直径在40-110nm之间,其中包含RNA、蛋白质、microRNA等多种物质,存在于血液、唾液、尿液、脑脊液和母乳等多种体液中。外泌体从发现至今已有30多年的历史,虽然较初被认为可能是细胞的“垃圾”,所以才被排出来,但是近年来研究表明外泌体具有功能活性并可进行细胞间信息传递。如今,研究已经发现外泌体在抗原提呈细胞中呈递抗原程中、一些病症细胞发生的发展、神经细胞信号转导过程中都发挥着重要作用。利用化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。外泌体提取:具有高粘度的生物样品。
外泌体的提取、分离方法:聚合物沉淀法。聚合物沉淀法用于分离病毒和其他的生物大分子已有50多年历史,近几年,将其作为一种新的方法来分离外泌体。目前,市场已经有应用聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)溶液提取外泌体的试剂盒,较常见的是SystemBiosciences公司的ExoQuick®和ExoQuick-TC®kits,该试剂盒操作简单不需要特殊的仪器,但是价格昂贵。提取外泌体的试剂盒主要成分是PEG8000(30%~50%),将试剂盒与体液或细胞培养液4℃孵育过夜,之后再低速离心。外泌体的提取方法,先用含无外泌体血清的培养基对人脂肪来源间充质干细胞进行饥饿培养。上海外泌体提取试剂单价
外泌体提纯试剂盒的特色与优势:无需沉淀试剂,也无需过夜培养。郑州正规外泌体提取试剂单价
当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时,外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式:一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合,进而启动靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中,外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合,从而启动细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合,非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体,包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。郑州正规外泌体提取试剂单价
外泌体的提取方法学规范、统一定量及鉴定等。关于外泌体的提取有超速离心、试剂盒、超滤法、蔗糖密度梯度离心等,然而各种方法均有其利弊。超速离心法是目前外泌体相关文章中的主流方法,由于离心步骤繁琐,费事费力,而且步骤多导致实验中容易污染,且损耗量大,使得较终回收的外泌体不稳定。而且对于抽提细胞上清来说,更是极为不请便,试想用提取300ml的上清需要6个50ml离心管,无论是过滤还是后续的每一步的离心去沉淀,都具有操作极其不便的缺点,总之非常麻烦。而超滤法存在外泌体会堵塞膜孔,造成浓缩效率低,浓缩管重复利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌体还可能会粘连成团,造成损失及较后的数据有误差,对于后续实验也有影响无法...