鼠尾胶原在心肌细胞氧化损伤中的保护作用:两组培养皿中,随着过氧化氢浓度的增高,均可见细胞凋亡状态明显加重,细胞存活率及细胞内过氧化氢活力明显下降,细胞凋亡率及细胞内丙二醛水平明显增高,Bcl-2/Bax比值明显降低,呈剂量依赖性。而在相同浓度过氧化氢诱导下,与对照组相比,实验组细胞凋亡状态明显减弱,细胞存活率、超氧化物歧化酶活力及Bcl-2/Bax比值增高,细胞凋亡率和丙二醛水平明显减低。表明鼠尾胶原对过氧化氢所致的心肌细胞氧化损伤具有保护作用,其机制可能与提高超氧化物歧化酶活力,减少丙二醛产生及提高Bcl-2的表达有关。成功建立了利用自制鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法,并且制作简便,成本低廉。武汉正规鼠尾胶原厂家推荐
提取鼠尾腱胶原工艺的优化:单因素分析,胶原提取率在一定参数范围内随浸提时间、乙酸浓度及料液比的增加而增加。正交试验,鼠尾腱胶原提取的较佳工艺参数为浸提时间72h、乙酸浓度0.5mol·L-1、料液比为1∶40。SDS-PAGE电泳显示,样品为Ⅰ型胶原,单宁酸沉淀实验显示胶原降解程度低,傅里叶红外光谱显示胶原结构完整。样品氨基酸含量测定符合胶原蛋白的成分特征。中性胶原溶液在37℃时能够形成固态胶原凝胶,胶原凝胶经过碳化二亚胺(EDC)交联后,扫描电镜下显示内部相互连接,构成孔径适中的蜂窝状多孔结构。结论:成功建立并优化鼠尾腱胶原蛋白的提取工艺,得出浸提时间、乙酸浓度及料液比等因素的较佳工艺参数,有效提高了鼠尾腱胶原的提取效率。厦门鼠尾胶原生产厂家鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便。
鼠尾胶原是一种天然培养基和一种天然的黏附剂,可用于细胞培养皿的包被,特别适合普通细胞培养器皿不易贴壁细胞的培养;也可用于制备三维胶原凝胶,使细胞在模拟的三维环境中生长。制备鼠尾胶原方法:1、取大鼠尾巴洗净,75%酒精浸泡5分钟;2、手持尾巴,用止血钳夹住鼠尾的较高,折断尾骨后拉出尾腱;3、将尾腱剪断置于平皿中,生理盐水浸泡;4、重复步骤2、3,直至尾腱量够用;5、吸去生理盐水,将尾腱称重(0.5-1克);6、将尾腱置于平皿内剪碎,转移至三角烧瓶中;7、按每克尾腱50ml的比例,加入0.1%醋酸溶液;8、摇晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置一星期;9、离心,4000转/分,10-15分钟;10、吸取上清,分装成小瓶,4℃保存。
利用鼠尾Ⅰ型胶原构建与人类自体骨组织化学成分和分子结构相近的仿生骨材料。 方法 通过醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型胶原蛋白,并重构成胶原纤维。然后,将重构后的胶原纤维放置在矿化液中模仿骨生物矿化2~6 d,通过透射电子显微镜和电子衍射观察骨生物矿化。 结果 酸解提取的鼠尾Ⅰ型胶原蛋白能够重构成胶原纤维,并且具有特征性的D-Band结构。透射电子显微镜和电子衍射显示:矿化2 d后,羟基磷灰石钙前体渗入胶原纤维,胶原纤维部分矿化;矿化6 d后,胶原纤维内部完全矿化,形成Ⅰ型胶原蛋白/羟基磷灰石钙的仿生骨材料。 结论 利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型胶原蛋白可以重构成胶原纤维,经矿化可形成与人类自体骨组织化学成分和分子结构一致的仿生骨材料。制备鼠尾胶原:吸取上清,分装成小瓶,4℃保存。
鼠尾胶原为贴附底物的人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式,为人鼻腔黏液纤毛运输系统的研究提供科学有效的方法。方法制备鼠尾胶原并铺片,以鼠尾胶原为贴附底物组织块培养法培养人鼻腔纤毛上皮细胞,培养7天时进行HE染色及扫描电镜和透射电镜观察细胞形态和结构,应用高速摄像技术测量纤毛摆动频率。结果鼠尾胶原要平坦均匀,平均厚度约为1mm;HE染色可见上皮细胞呈单层向周围爬开;扫描电镜下见纤毛上皮细胞呈不规则多角形,纤毛周围可见微绒毛;透射电镜下可见纤毛上皮细胞间为紧密连接;同一细胞任意两点纤毛摆动频率是相同的;同一来源体外培养的钩突和下鼻甲的纤毛摆动频率是相同的。结论以鼠尾胶原为贴附底物人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式的成功建立,为今后研究鼻内用药对纤毛除去功能的影响提供了良好的方法和途径。制作鼠尾胶原,并观察利用自制的鼠尾胶原所培养出大鼠耳蜗边缘细胞的效果。武汉正规鼠尾胶原厂家推荐
加到相应的培养器皿中,确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面。武汉正规鼠尾胶原厂家推荐
胶原蛋白的提取方法:酸法提取:酸法提取主要采用低离子浓度酸性条件浸渍处理原料,从而破坏分子间的盐键和希夫碱,而引起纤维膨胀、溶解。作为溶剂使用的酸,主要有盐酸或亚硫酸、磷酸、硫酸、醋酸、柠檬酸和甲酸等。酸法是提取胶原蛋白比较常用和有效的方法,用酸法提取的胶原较大程度地保持了其三股螺旋结构。此法处理快速,所得产品的分子量是连续的,适用于医用生物材料及原料的制备,但产品得率低,设备腐蚀严重,污染重。赵苍碧等[2]采用0.3 %的醋酸溶液在4 ℃下从牛腱中提取胶原蛋白,得到高纯度的胶原蛋白溶液。武汉正规鼠尾胶原厂家推荐
鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项:将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。B.含细胞的三维胶原的制备(以配制200ul鼠尾胶原蛋白(5mg/ml)加到(如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23ul10PBS10培养液,混匀(混匀后pH左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放20分钟待胶凝固后,加入适...