外泌体与肺病预后:外泌体mirRNA和蛋白质被认为是NSCLC的预后因子。Dejima等在研究NSCLC患者预后的生物标志物时发现,外泌体miR-4257和miR-21的含量显着上升。此外,还有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者较高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的复发率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血浆的外泌体时发现,NY-ESO-1是其中对低生存率有显着影响的标志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系统分析了28位NSCLC患者体内的365种miRNA,其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表达均下调,进一步研究发现,let-7f和miR-30e-3p水平可以区分早期和晚期NSCLC患者,高水平let-7f和miR-30e-3p与不良预后密切相关。如何高效地提取外泌体是实现这项新兴液体活检技术临床常规化应用的关键。外泌体的提取、分离方法:免疫亲和层析法。芜湖外泌体提取试剂厂家批发价
外泌体的提取分离:1、PEG-base沉淀法。聚乙二醇(PEG)可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀,早先应用于从血清等样本中收集病毒,现在也被用来沉淀外泌体,其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题:比如纯度和回收率低,杂蛋白较多(假阳性),颗粒大小不均一,产生难以去除的聚合物,机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等,因此发表文章时易受质疑。2、试剂盒提取。近几年来,市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒,有的是通过特殊设计的过滤器过滤掉杂质成分,有的则采用空间排阻色谱法(SEC)进行分离纯化,也有的则利用化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。这些试剂盒不需要特殊设备,随着产品不断更新换代,提取效率和纯化效果逐渐提高,因而逐渐取代超速离心法并推广开来。有些试剂盒操作简便,不用超速离心,同时可获得高纯度和高回收率的外泌体。正规外泌体提取试剂产品介绍外泌体提取:低速离心去除细胞和凋亡碎片。
外泌体,是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡,具有脂质双层膜结构,直径大约40-100nm。尽管外泌体较初在1983年就被发现,但人们一直认为它只是一种细胞的废弃物。然而较近几年,人们发现这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸,能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。这些发现点燃了人们对细胞分泌膜泡的兴趣。较近的研究发现外泌体在很多生理病理上起着重要的作用,如免疫中抗原呈递、一些病症的生长与迁移、组织损伤的修复等。不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能,可作为疾病诊断的生物标志物。
外泌体与免疫系统:不同的细胞来源的外泌体,包括免疫细胞(B细胞和树突状细胞)、病细胞、上皮细胞和间充质细胞,释放出带有载体的外泌体,可影响先天免疫系统和适应性免疫系统中受体细胞的增殖和各自的活性。CD4+和CD8+T细胞可直接或间接地受到外泌体的影响,刺激或压制其增殖和功能。外泌体与代谢性和心血管疾病:外泌体可以通过携带miRNA或代谢物分子在代谢性疾病和心血管疾病的发生的发展过程中起作用。体外培养心血管疾病的细胞收集的外泌体与疾病相关的代谢适应有关;体外培养的间充质干细胞和胚胎干细胞的外泌体具有保护心血管的作用。这些发现表明不同来源的外泌体可以通过传递miRNA,蛋白等物质改变受体细胞的代谢状态。外泌体检测作为一种新型的液体活检热点技术已被许多临床科研机构普遍地应用于一些病症和疾病的无创诊断。用于外泌体提取的体液收集注意事项:注意抗凝剂的选择。
外泌体相关蛋白质与肺病的诊断:近年来,高通量质谱分析被普遍地应用于筛选NSCLC外泌体蛋白的研究,这为我们揭示了更多具有生物标志物价值的分子。Birgitte等采用微阵列芯片技术研究了431例肺病患者和150例对照者血浆外泌体中的蛋白表达情况,发现CD151、CD171和TSPAN8这三种蛋白表达不光能区分一些病症与正常组织,同时也能区分各种肺病的组织亚型。此外,联合应用这三种蛋白诊断NSCLC的AUC达到0.74。Clark等采用纳升液联用技术(nano-ESI-LC-MS/MS)分析了来自正常支气管上皮细胞系和两个携带NSCLC细胞系的外泌体的蛋白表达谱,从中筛选出如细胞外基质金属蛋白酶诱导因子、溶酶体膜糖蛋白2等多种存在显着性差异表达的蛋白,同时检测分析这些蛋白有助于提高NSCLC诊断的敏感性和特异性。由于国内有关外泌体提取试剂的缺乏,我国对外泌体的研究还基本依赖于过程繁琐的超速离心和进口提取试剂盒。外泌体提取:重复离心操作还有可能对囊泡造成损害,从而降低其质量。昆明外泌体提取试剂厂家推荐
外泌体提取:尺寸排阻色谱。尺寸排阻色谱是基于大小而非分子量实现分离大分子。芜湖外泌体提取试剂厂家批发价
外泌体研究思路。外泌体研究通常与高通量测序的联系紧密,研究思路可以分为三大类:表达谱、分子标志物和分子机制方向,其中表达谱思路的特点就是短平快、通常以测序数据为主要内容,短平快发表3-5分文章。而分子标志物的特点是在表达谱基础之上加入大量样本验证,建立ROC、KM曲线,分析分子与临床疾病的相关性为主,通常文章影响因子在3-10分之间。分子机制研究,顾名思义要做到细胞功能、机制研究深度,因此工作量通常较大,影响因子通常能够上10+。唐山正规外泌体提取试剂产品介绍在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生和抗一些病症免疫等生理过程,与多种疾病的发生和进程密切相关。芜湖外泌体提取试剂厂家批发价
外泌体的提取方法学规范、统一定量及鉴定等。关于外泌体的提取有超速离心、试剂盒、超滤法、蔗糖密度梯度离心等,然而各种方法均有其利弊。超速离心法是目前外泌体相关文章中的主流方法,由于离心步骤繁琐,费事费力,而且步骤多导致实验中容易污染,且损耗量大,使得较终回收的外泌体不稳定。而且对于抽提细胞上清来说,更是极为不请便,试想用提取300ml的上清需要6个50ml离心管,无论是过滤还是后续的每一步的离心去沉淀,都具有操作极其不便的缺点,总之非常麻烦。而超滤法存在外泌体会堵塞膜孔,造成浓缩效率低,浓缩管重复利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌体还可能会粘连成团,造成损失及较后的数据有误差,对于后续实验也有影响无法...