市场上使用的病毒保存液主要有两种,一种是以运送培养基为基础改良的病毒维持液,另一种则为核酸提取裂解液改良的保存液。
前者的主要成分是Eagle's基础培养液(MEM)或Hank's平衡盐,添加了病毒生存所需的盐类、氨基酸、维生素、葡萄糖以及蛋白质,这种保存液使用酚红钠盐做为指示剂,溶液pH值在6.6-8.0时溶液呈粉红色。保存液中添加了必须的葡萄糖、L-谷氨酰胺和蛋白质,蛋白质的提供形式有胎牛血清或牛血清白蛋白,可以稳定病毒的蛋白质外壳。由于保存液营养成分丰富,有利于病毒的成活但是也有利于细菌的生长,如果保存液中污染了细菌,则会大量繁殖,其代谢产物中的二氧化碳会使保存液pH值下降,从粉红色变为黄色。因而大多数厂家都在配方中添加了抑菌剂成分,推荐使用的抑菌剂为青霉素、链霉素、庆大霉素及多粘菌素B等,不推荐使用叠氮钠、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MCI)和
5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMCI)等抑制剂,因为这些组分对PCR反应有影响。由于这种保存液提供的样本基本是活病毒,可以很大程度保持样本的原始性,后续不仅可以用于病毒的核酸提取检测,还能用于病毒的培养和分离。但是用于检测时应该注意的是必须灭活以后再进行核酸提取纯化。
还添加了牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质稳定剂,可保护病毒的蛋白质外壳,使其不易分解。北京衣原体保存液
深圳市美迪科生物医疗科技有限公司是病毒采样管、采样拭子,咽拭子等,现在来介绍一下我们的病毒采样管,什么了解一下什么是病毒采样管,病毒采样管是微生物采样运送管中的用于流感病毒、手足口病毒等病毒采样的一种成套的采样及运送的离心管,又名标本运送管,现已成为一种商品化的产品。
灭活的病毒采样管:
①、灭活款采样管培养基的成分:Hank’s液、冷冻保护剂、生物缓冲剂、氨基酸、灭活剂和RNA保护剂,对病毒样本进行灭活及保护RNA不降解。培养基中运用多种联合,有效防止细菌和污染。
②、加厚与防渗漏设计,保证样本不泄漏,符合 WHO 规定以及生物安全规定。
③、用途:用于2019-nCoV、,冠状病毒,流感病毒、禽流感、手足口、麻疹等病毒标本及支原体、衣原体、脲原体等标本的采集运送。
④、说明:采集后的样本若用于病毒核酸的检测,需配合使用核酸提取试剂盒及核酸检测试剂;若用于病毒分离用途,需配合使用细胞培养基。
江门支原体保存液****灭活型病毒保存液的主要优点是方便,快速,安全,缺点是检出率偏低;
核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两类,是生命的基本物质之一。病毒结构单一,就只含有一种核酸和蛋白质,因此检测出特征核酸就检测出了病毒。病毒属于寄生生物,采样后体外无法存活,如果不能及时检测,就需要放入病毒保存液中。为了保护病毒检测环境的安全性,就需要加入裂解盐来灭活病毒,释放出可以被检测的核酸即可。
非灭活型:除了灭活型的病毒保存液,还有非灭活型的病毒保存液,不含裂解盐,但是保存的病毒完整性更好,检出率更高,除了核酸检测外还可以用于其他研究。灭活型病毒保存液则使用上更安全,操作环境要求也不用那么严格,各有各的优势,非灭活病毒保存液的成分主要为Hank’s液基础,在Hank’s液基础上,添加了很多抑菌成分、冷冻保护剂等成分
灭活型病毒保存液的原理:
主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解型保存液,里面添加有高浓度的裂解盐,能够迅速高效地使待测样本利的病毒蛋白裂解失活,可以有效防止操作员二次,同时又含有Rnase酶抑制剂,能保护病毒核酸不被降解,后续的实验只要能检测出病毒的核酸即可以做出诊断。而且能在常温下保存相对较长的时间,节省了病毒样品保存以及运输的成本。
非灭活型病毒保存液的原理:
它同时保留了病毒的蛋白质外壳以及病毒核酸DNA或者RNA,这样就可以保证病毒样本核酸在送检过程中的完整性,虽然操作失误时会也有一定的性风险,但是这种保存液很大程度地保持了病毒样本的原始性,是一种培养型的病毒运输介质,需要注意的是采样后长时间保存需要保持严格低温保存。
病毒保存液的质量,是提高PCR检测阳性率与病毒分离阳性率的关键因素,从根本上决定了病毒采样管的质量。
前面已经说灭活病毒保存液可以使病毒失去活性,失去活性后是怎么来进行检测的呢?我们使用灭活型保存液的目的是裂解核酸,释放核酸然后通过后续的实时荧光RT-PCR进行核酸检测,通过这种方法来判断样本是否含有病毒特征核酸,即是否了病毒。而病毒结构单一,就只含有一种核酸和蛋白质,因此检测出特征核酸就检测出了病毒。通常我们在病毒采样后,样本并不是都能在样本采集处进行运输和保存的,因此我们就需要对采集到的病毒拭子进行运输和保留,不然病毒核酸会很快降解就无法检测到核酸了,所以就需要往采样管里加保存液来让病毒的核酸不要那么快被降解。除了用于核酸提取检测外,还能用于病毒的培养分离以及抗原的检测等但是采样后长时间保存需要保持严格低温。支原体保存液厂家直销
如果需要长途运输,建议使用冷链运输,避免采样管的样本错过了检测的比较好时期。北京衣原体保存液
采样前,在标签上注明样品信息;
根据不同的实验目的,用采样拭子在相应的部位采样;
采样后迅速将拭子放入含病毒运送培养基采样管中,在折断点处将其折断,旋紧管盖;
使用灭活款采样管新鲜采集的标本,可在常温(5-25°C)条件下,7天内运送至实验室,运输时有冰袋的效果会更好。用于核酸检测的标本,24小时内检测效果更好。
具体采样方法如下:
(1)鼻拭子:将拭子头轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以另一拭子拭另侧鼻孔,将拭子头浸入采样液中,在折断点处将其折断,弃之。(适合用本产品采样)
(2)咽拭子:用拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,同样将拭子头浸入采样液中,弃之。(适合用本产品采样)。 北京衣原体保存液
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