细胞培养中建议使用支原体检测的原因主要有以下几点: 1. 支原体污染率高:常规细胞培养中支原体污染率保守估计在15-35%之间。 2. 影响实验结果:支原体污染会严重干扰实验结果的可信度,影响培养细胞的形态和生理特征。 3. 难以用光学显微镜检测:支原体是极小的细菌,其细胞膜周围没有细胞壁,无法用光学显微镜检测到。 ...
查看详细 >>免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)的实验方法通常包括以下步骤: 1. 样本准备 2. 蛋白质浓度测定:使用BCA、Bradford或Lowry等方法测定裂解液中蛋白质的浓度。 3. 抗体预处理:如果使用预固定的抗体,需先将抗体固定在固相支持物上,如琼脂糖珠或磁性微珠。 4. 免疫沉淀...
查看详细 >>支原体去除试剂在清*支原体的过程中可能会对细胞的生长状态产生一定的影响。支原体去除试剂是一种非抗*素类试剂,它通过与支原体膜特异性结合,改变支原体膜的通透性,从而导致支原体破裂死亡。尽管该产品在作用期间可能会对细胞的活力和形态有一定的影响,但由于它不能穿过真核细胞的细胞膜,因此不会改变细胞的任何特性。支原体被清*后,细胞在后续的传代过...
查看详细 >>RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)的实验设计需要考虑多个方面,以确保实验的准确性和可重复性。 1. 目标蛋白的选择:确定你想要研究的目标RNA结合蛋白(RBP)。 2. 阳性和阴性对照:设计实验时,需要包括阳性对照和阴性对照。 3. 细胞培养与裂解:选...
查看详细 >>ChIP技术的应用: 1. 转录因子结合位点的鉴定:研究特定转录因子在基因组上的结合模式。 2. 组蛋白修饰的分布:分析不同组蛋白修饰在基因组上的分布情况,这些修饰与基因的活跃或沉默有关。 3. DNA甲基化研究:结合ChIP技术可以研究DNA甲基化对基因表达的影响。 4. 染色质结构和功能:研究染色质重塑对基...
查看详细 >>免疫沉淀技术RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)是一种用于研究细胞内RNA与蛋白质相互作用的技术。RIP技术可以帮助我们了解转录后调控网络的动态过程,并发现miRNA等非编码RNA的调节靶点。 RIP技术的原理是利用针对特定RNA结合蛋白的抗体,将细胞内的RNA-蛋白质复合物沉淀下来。然后,可...
查看详细 >>支原体去除试剂在清*支原体的过程中可能会对细胞的生长状态产生一定的影响。支原体去除试剂是一种非抗*素类试剂,它通过与支原体膜特异性结合,改变支原体膜的通透性,从而导致支原体破裂死亡。尽管该产品在作用期间可能会对细胞的活力和形态有一定的影响,但由于它不能穿过真核细胞的细胞膜,因此不会改变细胞的任何特性。支原体被清*后,细胞在后续的传代过...
查看详细 >>免疫沉淀技术RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)是一种用于研究细胞内RNA与蛋白质相互作用的技术。RIP技术可以帮助我们了解转录后调控网络的动态过程,并发现miRNA等非编码RNA的调节靶点。 RIP技术的原理是利用针对特定RNA结合蛋白的抗体,将细胞内的RNA-蛋白质复合物沉淀下来。然后,可...
查看详细 >>对于同一个样品,如果PCR检测结果为阳性而一步法恒温检测试剂盒结果为阴性,可能的原因包括: 1. 灵敏度差异:PCR方法通常具有较高的灵敏度,可以检测到单个拷贝的支原体DNA。相比之下,一步法恒温检测试剂盒可能需要更高的支原体拷贝数才能检测出阳性结果,例如需要10^3个拷贝。如果样品中的支原体数量低于一步法试剂盒的检测...
查看详细 >>一步法快速支原体检测的原理主要基于等温扩增技术,这是一种在恒定温度下进行的核酸扩增方法。以下是具体的步骤和原理: 1. 等温扩增技术:一步法快速支原体检测试剂盒利用LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification,环介导等温扩增)技术或类似的等温扩增技术。这些技术允许在恒定温度下进...
查看详细 >>免疫沉淀技术(Immunoprecipitation,简称IP)是一种生物学实验方法,用于从细胞或组织裂解物中分离和纯化特定蛋白质。这项技术依赖于抗体的高度特异性,通过抗体与目标蛋白质的结合,实现对目标蛋白质的富集和纯化。 具体操作步骤通常包括以下几个阶段:裂解细胞或组织,抗体与蛋白质结合,固相支持物的使用,免疫复合物的捕获,洗...
查看详细 >>支原体污染是细胞培养中普遍的问题之一,细胞库中或正在使用的细胞中,支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响: 01/ 争夺营养:支原体的污染会阻碍细胞生长和增殖 02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平 03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形态 04/ 损害...
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