外泌体因诺贝尔医学奖而被众人知晓,也因其作为生命信息传递者,在体液中普遍存在及易获得性等特点被誉为液体活检"新贵",成为疾病的精确诊断和治病研究的热点,尤其是在一些病症研究领域[。外泌体作为细胞间通信载体的作用现在已被普遍接受。外泌体包含胞质环境中富含的DNA,RNA,蛋白质和其它分析物,研究表明,外泌体中的运转RNA和蛋白质与一些病症的生长密切相关,有望作为诊断标志物。研究发现Vps4A是一个外泌体的重要调控因子,与肝病的发生有着密切的关系,Vps4A基因的表达下调肝病的发生及转移相关。通过microRNA高通量测序发现Vps4A基因能导致外泌体分泌肝病相关的重要microRNA,与肝病的发生密切相关。用于外泌体提取的体液收集注意事项:操作要轻柔迅速。郑州外泌体提取试剂厂家供应
外泌体与肺病预后:外泌体mirRNA和蛋白质被认为是NSCLC的预后因子。Dejima等在研究NSCLC患者预后的生物标志物时发现,外泌体miR-4257和miR-21的含量显着上升。此外,还有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者较高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的复发率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血浆的外泌体时发现,NY-ESO-1是其中对低生存率有显着影响的标志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系统分析了28位NSCLC患者体内的365种miRNA,其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表达均下调,进一步研究发现,let-7f和miR-30e-3p水平可以区分早期和晚期NSCLC患者,高水平let-7f和miR-30e-3p与不良预后密切相关。如何高效地提取外泌体是实现这项新兴液体活检技术临床常规化应用的关键。上海外泌体提取试剂生产厂家由于国内有关外泌体提取试剂的缺乏,我国对外泌体的研究还基本依赖于过程繁琐的超速离心和进口提取试剂盒。
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。李记生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒,组分经过优化处理,适用于细胞培养上清液、血清、血浆、尿液及其他体液(脑脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌体提取,并搭配纯化过滤装置,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒。注意事项:1.对于待测样品粘度过大时,可将样本用4℃预冷的1×PBS缓冲液进行等体积稀释处理。2.当血清、血浆、唾液等样品收获的外泌体浓度较高,收获的外泌体颗粒无法通过EPF柱纯化时,可用4℃预冷的1×PBS进行稀释后再通过EPF柱离心。3.针对外泌体标志蛋白(CD63,CD9,CD81等)进行Westernblot检测,可以鉴定所提的外泌体。通过超速离心(120000g/分钟)20小时以上才能获得足够的外泌体量。
外泌体与肺病预后:在当代精细医疗的大趋势下,外泌体的发现和研究为肺病的早期诊断和治病提供了崭新的方向。外泌体在液体活检中的巨大潜力可以为肺病患者的早期发现和早期诊疗提供可靠依据。根据一些病症来源的外泌体在肺病的发生的发展和侵袭转移过程中的作用及相关机制的研究,临床医疗人员可以针对不同的患者制定较合适的治病方案,以达到改善肺病患者生存率,延长肺病患者生存时间的目的。但是,针对外泌体的研究还存在诸多的问题有待广大研究者解决,如:外泌体的纯化及标记方法、如何寻找外泌体的靶基因、外泌体的作用机制及信号通路等。总而言之,外泌体的研究有着广阔的前景,基于外泌体与肺病的研究,有望研发出能够应用于肺病临床诊断和治病的有效措施,造福更多的患者。有的是通过特殊设计的过滤器过滤掉杂质成分,有的则采用空间排阻色谱法(SEC)进行分离纯化。
外泌体(exosome)是所有细胞释放出的菌类大小的颗粒。它们天然地存在于血液中。根据来自美国德州大学MD安德森一些疾病中心的一项新的研究,对外泌体进行基因操纵可能提供一种新的胰腺病治病方法。论文通信作者为德州大学MD安德森一些疾病中心一些疾病生物学系研究员RaghuKalluri博士。在这项新的研究中,经过基因修饰的外泌体(被称作iExosome)能够运送特异性地靶向KRAS突变基因的小RNA分子,从而导致胰腺病模式小鼠病情缓解,增加它们的总存活率。这些研究人员采用了一种被称作RNA干扰(RNAi)的靶向方法:利用这些天然的纳米颗粒(即外泌体)运送小干扰RNA(siRNA)或短发夹RNA(shRNA)分子来靶向胰腺病细胞中的KRAS突变基因,从而影响多种胰腺病模型的一些病症负荷和存活。他们证实外泌体能够作为一种高效的RNAi载体发挥作用,这是因为这些纳米大小的囊泡(即外泌体)轻松地在体内迁移和进入靶细胞(包括病细胞)中。外泌体在免疫中抗原呈递、一些病症的生长与迁移、组织损伤的修复等生理病理上起着重要的作用。外泌体在免疫中抗原呈递、一些病症的生长与迁移、组织损伤的修复等生理病理上起着重要的作用。南昌外泌体提取试剂厂家供应
获得的外泌体纯度较高,但步骤繁琐,耗时。郑州外泌体提取试剂厂家供应
外泌体鉴定:外泌体分离之后,需要经过一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。鉴定方法从物理特征到表面分子标志物,多角度进行鉴定。l透射电镜鉴定法:简称TEM,适合外泌体双层囊膜超微结构观察,即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。l纳米颗粒追踪分析法:简称NTA,该方法能保证外泌体原始状态、检测速度快,检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。lWesternblot分子标志物检测:外泌体标志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;细胞质蛋白,如肌动蛋白(Actin)和钙磷脂结合蛋白(Annexins);使用可截留100KD分子量的膜,通过离心截留上清中的外泌体,截留完成后。郑州外泌体提取试剂厂家供应
外泌体的提取方法学规范、统一定量及鉴定等。关于外泌体的提取有超速离心、试剂盒、超滤法、蔗糖密度梯度离心等,然而各种方法均有其利弊。超速离心法是目前外泌体相关文章中的主流方法,由于离心步骤繁琐,费事费力,而且步骤多导致实验中容易污染,且损耗量大,使得较终回收的外泌体不稳定。而且对于抽提细胞上清来说,更是极为不请便,试想用提取300ml的上清需要6个50ml离心管,无论是过滤还是后续的每一步的离心去沉淀,都具有操作极其不便的缺点,总之非常麻烦。而超滤法存在外泌体会堵塞膜孔,造成浓缩效率低,浓缩管重复利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌体还可能会粘连成团,造成损失及较后的数据有误差,对于后续实验也有影响无法...