罗丹明123一种可对活细胞线粒体染色的细胞染色试剂。罗丹明123可透过细胞膜且在活细胞的线粒体内聚集,并发出黄绿色荧光。罗丹明123***用作检测线粒体膜电位,也常用于细胞凋亡检测。由于细胞内ATP的量与罗丹明123的荧光强度之间有相关性,此荧光染料被应用于检测细胞内的ATP。罗丹明123的比较大激发波长为507nm,比较大发射波长为525nm。在荧光显微镜下观察,呈现黄绿色荧光。
一:工作液配制用缓冲液或者预热的培养液直接稀释储存液到需要的工作液浓度(1~20µM),充分混匀。具体的工作液浓度使用者要根据自身实验体系进行调整。【注意】:对于细胞实验,要控制好总体稀释倍数,DMSO在培养液中的浓度不能超过0.1%,以避免DMSO对细胞的影响。
二:荧光显微镜观察1、用载玻片准备细胞。细胞数目应为5×104~5×105个/mL。2、在载玻片上孵育细胞,用PBS或HBSS洗涤细胞。3、将Rhodamine123工作液加入载玻片并在37℃下孵育30min至1小时。4、去除Rhodamine123溶液并用培养液洗涤细胞(洗涤细胞后如果要固定,加入10%福尔马林缓冲液并孵育15~20min,接着用PBS洗涤)。5、荧光显微镜观察细胞。 Cy7 DiC18(DiR)是一个亲脂性、近红外荧光花青染料,这个染料常用于标记细胞质膜。西藏荧光染料激发
FITC荧光标记蛋白的应用及特点:活性荧光染料,如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、罗丹明B(RhodamineB)或AlexaFluor染料,可用于标记抗体或蛋白质功能基团,生成分子探针,并通过荧光成像进行检测。当用荧光染料化学标记特异性抗体或其他纯化生物分子时,它们成为用于检测靶抗原或相互作用配偶体的荧光探针,用于细胞成像、流式细胞手术、蛋白质痕迹和酶联免疫吸附实验(ELISA)。由于荧光标记物具有无放射物污染、操作简单等优点,在蛋白质功能研究、药物筛选等许多研究领域得到了越来越广泛的应用。
南京星叶生物科技有限公司Super Fluor 系列(效果同Alexa Fluor系列)
且Super Fluor活化酯(与Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同) 辽宁荧光染料ICGCy3染料的激发峰和发射峰分别在550 nm和570 nm左右。
三、细胞实验D-荧光素钾盐体外生物发光试验:D-荧光素钾盐,无菌纯水,完全培养基(自行配制)1、贴壁细胞:将细胞接种于培养板中孵育数小时或过夜,使细胞贴壁。悬浮细胞:可以将细胞接种于培养板后直接进行后续操作,无需孵育。如果倍增时间相对较短,则应考虑倍增时间进行细胞计数。2、将15mg荧光素钾盐溶解于1ml无菌水中,制备成100X荧光素储备液(15mg/ml),轻轻颠倒摇动至荧光素钾盐完全溶解。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。3、用预热好的细胞培养基1∶100稀释100X荧光素储备液(15mg/ml),配制成荧光素工作液(终浓度150μg/ml),即配即用。4、去除培养板中的培养基。5、在成像前,将适量荧光素工作液加入细胞中,然后进行图像分析。注意:成像前在37℃下对细胞进行短时间孵育可增强信号。孵育时间取决于特定的细胞类型。一般来说孵育10分钟就足够了,根据需要进行测试和调整。6、每隔10分钟,**多40分钟,使用VILBERFUSIONFX成像系统检查体外生物发光,确定动力学曲线并找出细胞的峰值成像时间点
管可用于实验室的荧光团数量众多,但这些染料通常属于以下三组之一:荧光染料:这些是用于在体外标记生物相关分子的小型有机天然或合成荧光分子。该组中的一些荧光染料包括荧光素、溴化乙锭和花青。荧光蛋白:这些是较大的、生物制造的蛋白质,由于它们的大分子结构而发出荧光。GFP、RFP和YFP是属于该组的一些染料。量子点:这些高荧光合成纳米晶体由半导体材料制成。随着荧光基本特性的广泛应用和该领域的显着进步,已经针对特定应用和仪器开发和优化了数百种活性荧光染料。同样,多年来,大量复杂的荧光技术(例如,FRET、TRF、FP、FRAP、FACS、FCS)也在不断发展。D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物,可催化萤火虫产生典型的黄绿色光。
花青类荧光染料属于共振染料,其特征在于具有离域电荷的氮原子(两个氮原子)之间的聚甲炔染料。由于与生物分子的低非特异性结合以及明亮的荧光,花青类荧光染料已成为一些当下流行的用于标记核酸的荧光染料。花青类染料分为两大类:非磺化花青类染料-该组中的一些染料包括cy3、cy3.3、cy5、cy5.5、cy7和cy7.5。在大多数情况下,这些染料的特点是水溶性低,但胺的盐酸盐和酰肼除外。它们首先溶解在有机溶剂(共溶剂)中,然后在生物分子标记期间添加到含有生物分子的溶液中。而“Cy”**花青,***个数字**存在于亚油啉基团之间的碳原子数。另一方面,添加0.5后缀以表示苯并稠合花青。这些荧光染料通常用于有机介质。磺化类花青染料-该组由磺基-Cy3、磺基-Cy5和磺基-Cy7组成。顾名思义,这些花青的特征是一个磺基,它有助于染料分子在水相中的溶解。与非磺化花青相比,这些花青更易溶于水,因此不需要溶解在有机溶剂中进行标记。磺化花青通常用于标记疏水性蛋白质、水溶液中的纳米颗粒以及可能被DMSO或DMF变性的敏感蛋白质。两组染料均可用于标记以下生物分子:肽、寡核苷酸和DNA、抗体、可溶性蛋白质。染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一类亲脂性荧光染料家族,用于标记细胞膜和疏水性组织。贵州重庆荧光染料
花青类荧光染料属于共振染料,其特征在于具有离域电荷的氮原子(两个氮原子)之间的聚甲炔染料。西藏荧光染料激发
蛋白荧光标记技术是目前**为常见的蛋白体外标记技术,利用级联放大反应原理,将极度敏感性且易于检测的荧光素通过某个基团吸附或共价结合后,标记到特异性抗原或抗体分子上,应用荧光显微镜观察荧光标记物因增强放大效应而产生颜色、光谱等变化,以分析示踪相应抗体或抗原性质与含量的方法。该技术在具有高度精确性的荧光显微镜下,借助高度灵敏性的荧光检测,在各种生物过程中对目的蛋白进行可视化,从而通过抗原抗体高度特异性免疫定量表达或在细胞研究中定位。蛋白荧光标记已成为研究蛋白质互作、酶活性、***示踪以及细胞分选重要工具。蛋白标记常用荧光染料随着蛋白荧光标记技术不断发展,各类荧光素广泛应用于生物实验中,目前常用标记蛋白/抗体的荧光素主要有BODIPY类、香豆素类、罗丹明类、近红外类、NBD胺类以及菁染料等。南京星叶生物科技有限公司提供多种性价比高的各类活化荧光素,其荧光染料覆盖波长范围从350nm到790nm,例如Cy系列、SuperFluor系列(效果同AlexaFluor系列)等,用于标记抗体、多肽以及蛋白功能基团,继而生成分子探针,通过荧光成像进行相应检测。西藏荧光染料激发
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