流式细胞术可以更精确地定量表达特定荧光基因的细胞,以评估转染效率。另一种评估转染效率的方法是通过监测转染后的特定蛋白表达。将转基因引入细胞可能会改变由转基因或细胞中其他基因编码的蛋白质的表达。同样,转染小RNA也可以调节宿主细胞中特定下游遗传靶点的表达。免疫印迹和免疫荧光染色可用于评估转染后蛋白表达的变化。在这两种方法中,使用特异性抗体结合靶蛋白是至关重要的,后者需要使用与一抗结合的荧光标记二级抗体来检测感兴趣的蛋白质。另一方面,在免疫印迹中,可以使用辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二抗与一抗结合,进行特异性蛋白检测。免疫印迹法允许对蛋白质表达进行半定量,而免疫荧光染色法允许通过荧光显微镜或流式细胞术进行定量检测。通过检查特定蛋白表达来评估转染效率更具可重复性和直接性。然而,使用抗体所固有的非特异性蛋白质结合问题和获得假阴性结果的可能性,这可能是由于不及时测定蛋白质表达引起的,仍然是使用这些方法的缺点。为了在体外和体内可重复地传递基因和siRNA,含有核酸的脂质体、脂丛和多丛的配方需要精确组成转染试剂。重庆广州转染试剂
脂质复合物又称阳离子脂质-核酸复合物(CLNACs),是由非离子核酸与阳离子脂质体(CLs)表面结合,**终形成多层脂质-核酸复合物而形成的。带负电荷的核酸被吸引到带正电荷的囊泡表面,**初与停靠在阳离子囊泡表面的核酸分子形成复合物,然后发展到核酸分子持续粘在脂质分子上的阶段,脂质双分子层围绕紧实的核脂质颗粒。复合物形态的这种异质性可能归因于囊泡的脂质组成、复合物形成的方式、脂质:核酸比例、核酸结构的大小、试剂的批次差异以及用于处理和可视化这些复合物的技术。除了静电吸引外,疏水相互作用被认为有助于脂质和核酸之间的复合物形成。因此,根据正电荷(阳离子脂质)与负电荷(核酸上的磷酸基)的电荷比,脂质体可能通过与细胞表面的蛋白聚糖基团等带电残基的静电相互作用,或通过与质膜疏水区域的疏水相互作用进入细胞。天津转染试剂定做转染是将外来核酸传递到真核细胞中以修饰宿主细胞的遗传组成的过程。
核酸与转染试剂的比例对转染效率也有影响。在一项涉及原代人成肌细胞的研究中,使用不同的核酸比例来比较转染效率的影响,转染试剂包括FuGENE6、Effectene和ExGen500(一种基于pei的试剂)。该研究的一个***发现是,转染效率可能不一定与所用试剂的体积直接相关。例如,2µgDNA与5µLFuGENE6试剂的比例被证明可以产生比较好的转染效率,而更低或更高的DNA与试剂的比例并不能提高效率。在另一项涉及转染人胃腺*细胞系的研究中也观察到类似的发现,即在一系列组合中使用比较高转染试剂与DNA比体积测试时,转染效率并未达到比较好。使用不成比例的高转染试剂量会导致不必要的细胞毒性,从而降低整体转染结果。因此,确定合适的核酸与试剂比例是启动新的转染研究以实现高转染效率和低细胞毒性的重要步骤。
转染是将外来核酸传递到真核细胞中以修饰宿主细胞的遗传组成的过程。在过去的30年里,转染因其广泛应用于研究疾病的细胞过程和分子机制而越来越受欢迎。了解疾病的分子途径,可以发现可能用于疾病诊断和预后的特定生物标志物。此外,转染可以作为基因***中的策略之一,用于***无法***的遗传性遗传病。***,生命科学技术的进步允许将不同类型的核酸转染到哺乳动物细胞中,这些核酸包括脱氧核糖核酸(DNA),核糖核酸(RNA)以及小的非编码RNA,如siRNA,shRNA和miRNA。通常转染可分为稳定转染和瞬时转染两种类型。稳定转染是指通过将外源DNA整合到宿主核基因组中,或在宿主核中作为染色体外元件维持一个外源载体来维持转基因的长期表达。该转基因可然后通过细胞的复制进行本构性表达。相比之下,瞬时转染不需要将核酸整合到宿主细胞基因组中。核酸可以以质粒的形式或寡核苷酸的形式转染。因此,随着宿主细胞的复制,转基因表达**终会丢失。瞬时转染通常用于短期研究,以研究特定基因敲入/敲入的影响。相比之下,稳定转染在需要大规模蛋白质生产的长期遗传和药理学研究中很有用。选择合适的转染试剂可能取决于几个因素,包括转染核酸的类型和转染的复杂性(单转染或共转染)。
deae-葡聚糖是一种化学修饰的葡聚糖类似物。通过用二乙基氨基乙基修饰,右旋糖酐链的酰胺化很容易被质子化,这使得它可以自组装成带负电荷核酸的纳米颗粒。deae -葡聚糖是***个用于核酸转染的阳离子聚合物。早在20世纪50年代,它就极大地增强了脊髓灰质炎病毒和SV40病毒DNA在哺乳动物细胞中的转染。随后,deae -葡聚糖被广泛应用于RNA或DNA的转染。然而,由于以下原因,deae -葡聚糖并没有作为比较好候选物:转染效率远低于脂质体等其他试剂;deae -葡聚糖的细胞毒性和免疫原性不容忽视。基于病毒的转染,或者更具体地称为转导,涉及使用病毒载体将特定的核酸序列带入宿主细胞。广西转染试剂毒性低
转染是将外源核酸送入细胞的过程,其目的是使外源基因编码的蛋白能够在细胞中表达。重庆广州转染试剂
阳离子脂质体合成中常用的分子是中性脂质二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。DOPE的作用是促进膜融合,并有助于质膜或核内体的不稳定。此外,由于阳离子脂质相互排斥,因此需要DOPE等辅助脂质来稳定阳离子脂质体(CLs)悬浮液,并抵消其他载体如聚乙烯亚胺(PEI)和树状大分子中存在的阴离子糖胺聚糖的抗转染作用。没有中性脂质的脂质体具有较低的转染率,尽管情况并非总是如此。不同的转染率可能是由用于配制脂质体的阳离子:中性脂质的不同比例引起的。如上所述,CLs介导的核酸转移的成功取决于许多因素,这些因素可能解释了脂质体(脂质体介导的转染)的内在变异性,特别是在体内。重庆广州转染试剂