广东天津转染试剂

脂质体转染是一种常用的将外源基因导入细胞的方法，脂质体大小：脂质体的大小也可能影响转染效率。较小的脂质体可能更容易进入细胞，但可能携带的 DNA 量较少。较大的脂质体可能携带更多的 DNA，但可能更难进入细胞。研究发现，阳离子脂质体的大小与转染效率之间存在一定的关系。随着脂质体尺寸的增加，转染的主要途径可能从网格蛋白介导的内吞作用转变为脂筏介导的内吞作用，同时也可能观察到巨胞饮作用。这种变化可能会影响脂质体在细胞内的运输和释放，从而影响转染效率。在腺病毒载体或脂质体的全身递送后，转基因表达相对短暂。广东天津转染试剂

选择**适合的RNA转染试剂是一个复杂的过程，需要综合考虑多个因素。以下是一些关键的考虑因素和方法来帮助选择**适合的RNA转染试剂。一、考虑转染效率转染效率是选择RNA转染试剂的重要指标之一。较高的转染效率可以确保更多的细胞成功摄取和表达RNA。实验细胞类型：不同的细胞类型对转染试剂的敏感性可能不同。例如，一些细胞系可能更容易被某些转染试剂转染，而另一些细胞则可能对不同的试剂更敏感。在肾*细胞系786-O和ACHN中，微小RNA-1180（miR-1180）转染后，通过实时定量PCR和Westernblot等方法检测到p21mRNA和蛋白表达的变化，表明该转染在肾*细胞中有一定的效果1。在乳腺*细胞系T47D和非*性细胞MCF-10A中，研究比较了Lipofectamine2000和PAMAMG5两种转染试剂对短RNA的转染效率，结果显示Lipofectamine的转染效率明显高于PAMAMdendrimer2。检测方法：可以使用多种方法来检测转染效率，如荧光显微镜、流式细胞仪分析、实时定量PCR等。例如，在脂质体方法用于modRNA转染各种类型细胞的初步研究中，分别用RNAiMax及MessageMax将modGFP转染入MEF细胞，应用荧光显微镜、流式细胞分析仪检测并比较两种转染试剂的转染效率和蛋白表达效果5。青岛转染试剂现货转染试剂的冻融被认为是另一个可能影响转染效率的潜在因素。

在人类多能干细胞衍生的心肌细胞（HPSC-CMs）中的应用低转染效率是实现HPSC-CMs在疾病建模和心脏修复研究中广泛应用的障碍。通过优化四个基本参数，即血清补充剂、复制和转染之间的时间、试剂与DNA比以及细胞密度，使用Promega的Viafect™转染试剂能够将HPSC-CMs转染至约95%的效率28。尽管活力有所降低，但转染后的HPSC-CMs仍保持了高纯度和结构完整性，确保了至少14天的转染基因持续表达，为心脏相关疾病的研究开辟了新机遇。在C2C12细胞中的应用C2C12细胞在肌肉领域***使用，但它们和原代成肌细胞一样难以转染，影响了下游实验。虽然自2015年以来超过95%的使用C2C12细胞的报告使用了一种金标准转染剂（如Lipofectamine®），但有研究表明其效率低于30%。通过比较五种商业试剂（Lipofectamine®3000、Viafect™、Fugene®HD、C2C12CellAvalanche®和JetOPTIMUS®）在C2C12细胞中的转染效率，发现通过优化DNA:转染剂比例和细胞密度，所有试剂都能达到超过60%的转染效率，且对细胞生长和活力影响有限。这些试剂还能在C2C12细胞中转染后高效生成GFP阳性的肌管，但在转染siRNA和对原代肌肉细胞的转染中表现出较低效率和较高毒性3。

三、脂质体组成对转染效率的影响不同脂质组成的影响：研究发现脂质体的组成对不同类型细胞的转染效率有影响。例如，四种不同的DOTAP与DOPE重量比的脂质体配方对不同细胞系的转染效率不同。Huh7和AGS细胞的比较好脂质体组成是T1P0和T3P1；COS7细胞是T3P1和T1P1；A549细胞是T1P1和T1P36。脂质体结构的影响：脂质体复合物的形状会随着DOPE比例的增加从层状结构变为倒六角形结构，但在所有使用的细胞系中，特定结构在转染效率上没有明确的优势6。四、其他因素的影响血清的影响：对于某些细胞，血清的存在会影响转染效率。如Siha细胞在无血清培养基中培养时转染效率更高，而在Caco-2细胞的转染中，血清在本实验室条件下并不影响转染效率19。细胞传代次数：Caco-2细胞在2-5次细胞传代时转染效率比较高9。综上所述，脂质体转染对不同类型细胞的影响存在多方面的差异，包括转染效率、影响因素以及脂质体组成等。在进行脂质体转染实验时，需要根据不同的细胞类型优化转染条件，以获得比较好的转染效果。核酸与转染试剂的比例对转染效率也有影响。

优化电转方法筛选**适电压和脉冲时间：不同细胞种类电转所需的**适电压和脉冲时间不同。例如，人成纤维细胞电转modRNA的**适电压为440V，**适脉冲时间为30ms；Hela、293T、3T3细胞电转**适电压分别为425V、400V、440V，**适脉冲时间均为30ms；人/兔外周血来源的悬浮的单个核细胞的**适电压分别为840V和860V，**适脉冲时间均为20ms。通过筛选**适电压和脉冲时间，可以提高RNA转染效率，同时证明了电转法转染modRNA进入细胞的可行性，且可同时将两种modRNA导入同一个细胞内6。RNA电穿孔高效转染原代淋巴细胞：使用体外转录的mRNA通过电穿孔可以实现高基因转染效率和低转染相关毒性。例如，在用GFP或mCD62L转染的受激原代人和鼠T淋巴细胞中观察到90％以上的转基因表达和80％以上的活细胞。GFPRNA对未刺激的人PBMC或鼠脾细胞进行电穿孔，分别产生95％和56％的GFP⁺细胞。此外，基因表达迅速且持久，对经过RNA电穿孔的T淋巴细胞未观察到不良影响7。转染时推荐使用血清减少或无血清培养基包括阳离子转染试剂，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。苏州转染试剂代做

一项与抗血管生成基因传递高度相关的发现是，阳离子脂质体（CLs）选择性地靶向的血管系统。广东天津转染试剂

    RNA转染试剂在不同细胞类型中的效果存在***差异。以下将详细阐述不同细胞类型对RNA转染试剂效果的具体影响。肾*细胞系786-O和ACHN：微小RNA-1180（miR-1180）转染对肾*细胞系786-O和ACHN生长有影响。实时定量（qRT）-PCR检测显示转染miR-1180后，786-O和ACHN细胞中p21mRNA水平分别上调。Westernblot检测表明p21蛋白表达趋势与qRT-PCR结果相符，同时细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）4、CDK6和CyclinD1蛋白的表达明显下调。流式细胞术（FCM）结果显示转染miR-1180后，位于G0/G1期的细胞比例明显增大，而位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降，表明细胞周期被阻滞在G0/G1期。MTS结果显示转染miR-1180后，两种肾*细胞活力明显降低。集落形成实验显示miR-1180组的集落数数量明显较少，表明细胞增殖能力降低1。HeLa细胞：两种常见的RNA干扰（RNAi）转染试剂DharmaFECT1和INTERFERin，在使用非靶向siRNAs的模拟转染中，会引起HeLa细胞脂质组的改变。一些脂质对两种可能化学性质不同的转染试剂都有反应，而其他脂质种类只对其中一种试剂有反应。虽然这些脂质组改变的功能影响尚待研究，但实验表明在RNAi实验中使用适当的模拟转染对照非常重要，比较好辅以正交扰动。 广东天津转染试剂