企业商机
免疫沉淀基本参数
  • 品牌
  • 世途科生物
  • 产品名称
  • 免疫沉淀磁珠Protein A/G
  • 有效期
  • 12个月
免疫沉淀企业商机

免疫沉淀Co-IP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构  (直径 50-150 μm)  可以结合抗体  (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ,尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力,但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多,使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之,琼脂糖珠的结合能力较强,而磁珠在得率,可重复性以及自动化方面有明显的优势。
免疫沉淀Co-IP技术选琼脂糖珠还是磁珠?苏州蛋白免疫沉淀磁珠的选择

苏州蛋白免疫沉淀磁珠的选择,免疫沉淀

Co-IP(免疫共沉淀)技术主要用于研究蛋白质之间的相互作用,其实验设计如下:
1. 样品准备:Co-IP实验通常有两种,一种是内源性蛋白相互作用验证,一种是非内源性蛋白相互作用验证。内源性相互作用通过质粒共转染的方式将两种蛋白转染至同一细胞内表达;非内源性相互作用则是将含有靶蛋白的组织进行预处理及细胞裂解获得细胞裂解液。
2. 沉淀诱饵蛋白:利用磁珠偶联抗体沉淀诱饵蛋白。在样品中加入磁珠偶联抗体,抗体会与诱饵蛋白结合,利用磁铁将磁珠拉下,同时诱饵蛋白会一起被沉淀出来。
3. SDS-PAGE及WB检测:得到沉淀后,需要验证沉淀中是否存在相互作用蛋白。先利用SDS-PAGE将蛋白复合物分离,随后利用WB检测是否存在靶蛋白。
4. 实验对照设置:为了避免“假阳性”,需要设置正确的对照,包括阴性对照和阳性对照(Input组)。Input组为直接利用抗体对细胞裂解液进行WB检测,验证细胞裂解液中存在蛋白。
5. 结果真实性:确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的,而并非外源非特异蛋白。使用单克隆抗体有助于避免污染的发生。
苏州Protein AG免疫沉淀技术服务免疫沉淀技术ChIP的优缺点是什么?

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免疫共沉淀分析(Co-IP)与IP十分类似,基本的技术都是采用目标抗原特异性的固相化抗体;但IP的目标是纯化单一抗原,而Co-IP旨在分离抗原及与抗原结合的蛋白质或配体。

在Co-IP实验中,已知抗原称为诱饵蛋白,与之结合的蛋白则称为靶蛋白。靶蛋白可能是一些复杂的伴侣蛋白、信号分子、结构蛋白、辅助因子等,蛋白间相互作用强度范围可能介于高度瞬时和十分稳定之间。
基本的Co-IP实验方案与IP相同,实际上任何IP系统均可用于Co-IP。但是,还有许多其他因素需要考虑,例如,结合和洗涤条件的优化,优化时,需要考虑到诱饵蛋白-靶蛋白的相互作用强度以及抗体-诱饵蛋白的亲和力。

免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)是一种用于研究蛋白质相互作用和蛋白质特性的重要方法。它具有一些明显的优点,但也存在一些局限性。
优点:
1. 特异性强:IP技术利用特异性抗体对目标蛋白进行捕获,因此具有很高的特异性。
2. 富集低丰度蛋白:可以从小量样本中富集低丰度的目标蛋白,有助于研究稀有蛋白。
3. 研究蛋白质相互作用:通过Co-IP等变体技术,可以研究蛋白质之间的相互作用。
4. 操作简便:IP实验步骤相对简单,容易在实验室中实施。

缺点:
1. 对抗体质量依赖性高:需要高质量的特异性抗体,否则可能导致假阳性或实验失败。
2. 存在非特异性结合:样本中的其他蛋白质可能非特异性地结合到抗体或固相载体上。
3. 可能破坏蛋白质的天然构象:裂解和洗涤步骤可能破坏蛋白质的天然结构,影响其功能。
4. 可能存在背景噪声:非特异性结合可能导致背景噪声,影响结果的清晰度和解释。

免疫沉淀技术RIP的应用有哪些?

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免疫共沉淀分析(Co-IP)实验原理与IP十分类似,基本的技术都是采用目标抗原特异性的固相化抗体;但IP的目标是纯化单一抗原,而Co-IP旨在分离抗原及与抗原结合的蛋白质或配体。

在Co-IP实验中,已知抗原称为诱饵蛋白,与之结合的蛋白则称为靶蛋白。靶蛋白可能是一些复杂的伴侣蛋白、信号分子、结构蛋白、辅助因子等,蛋白间相互作用强度范围可能介于高度瞬时和十分稳定之间。基本的Co-IP实验方案与IP相同,实际上任何IP系统均可用于Co-IP。但是,还有许多其他因素需要考虑,例如,结合和洗涤条件的优化,优化时,需要考虑到诱饵蛋白-靶蛋白的相互作用强度以及抗体-诱饵蛋白的亲和力。
免疫沉淀技术IP的应用有哪些?苏州Co IP免疫沉淀技术服务

免疫沉淀的操作步骤?苏州蛋白免疫沉淀磁珠的选择

免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)的实验方法通常包括以下步骤:
1. 样本准备
2. 蛋白质浓度测定:使用BCA、Bradford或Lowry等方法测定裂解液中蛋白质的浓度。
3. 抗体预处理:如果使用预固定的抗体,需先将抗体固定在固相支持物上,如琼脂糖珠或磁性微珠。
4. 免疫沉淀反应:将裂解液与特异性抗体(固定或未固定)混合,并在4°C下缓慢摇晃孵育过夜,以允许抗体与目标蛋白质充分结合。
5. 固相支持物的回收:对于未固定的抗体,加入与抗体特异性结合的蛋白A或蛋白G结合的固相支持物。
6. 洗涤:去除未结合的蛋白质和杂质,通常需要多次洗涤固相支持物。
7. 洗脱:使用适当的洗脱缓冲液(如加热的SDS加载缓冲液或酸性缓冲液)从固相支持物上洗脱免疫复合物。
8. 后续分析:对洗脱的蛋白质进行SDS-PAGE电泳、Western Blot、质谱分析等,以进一步分析目标蛋白质。
苏州蛋白免疫沉淀磁珠的选择

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