为了让所有实验室都能同时快速自动消化多种抗体,Genovis的FabRICATORMagIC的设计具有灵活性,适用于一系列自动化平台。我们在ThermoScientific™KingFisher™纯化系统上优化了FabRICATORMagIC的工作流程,但它可以转移到其他自动化平台,如果没有自动化,在振动台上也能同样出色地工作。消解后,将含有处理样品的深孔板直接转移到LC-MS的自动进样器中进行快速色谱分析,或转移到其他分析方法进行分析。FabRICATORMagIC与在消解缓冲液中添加0.05%聚山梨醇酯20兼容,以极大限度地减少自动化系统中可能发生的纯粹压力。使用KingFisher仪器处理样品时,样品制备非常简单。将样品、树脂和缓冲液移液到指定的孔或板中,然后将板放入仪器中。设计用于FabRICATORMagIC的BindIt™协议将控制每个步骤的孵育温度和时间。降低样品处理错误的风险,同时提高通量。陕西FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白组学
与IdeS不同,Romiplostim 由四个相同的血小板生成素 (TPO) 受体结合肽和一个 Fc 片段组成,通过柔性聚甘氨酸序列连接在一起。与度拉糖肽类似,用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下过夜,或用 GlySERIAS 冻干 1 小时并在 37°C 下过夜消化该蛋白质。 链间二硫键被还原,以便于通过反相LC-MS进行以下分析。与度拉糖肽的观察结果类似,用固定化酶消化产生均质的 Fc/2,剩下一个连接子残基,此处为甘氨酸残基。这有助于识别专门位于Fc区域的修改。用冻干酶消化 1 小时得到 Fc/2,剩余 4 个甘氨酸残基和少量的 Fc/2 仍与一个 TPO 肽连接。另一方面,这使得研究 Fc/2 和第yi个肽之间的连接区域成为可能,而不会受到第二个肽的干扰。用 GlySERIAS 冻干液过夜消化产生 2 个 Fc/2 变体,分别剩下 4 个和 1 个甘氨酸残基。根据消化时间的不同,使用冻干产物释放的肽以五或七种变体存在,接头中残留的甘氨酸残基数量不同,而使用固定化产物释放的肽以四种变体存在。重庆FabRICATOR ZIdeS蛋白酶FabRICATOR Magic自动平行抗体酶切和亚基生成,用于处理与克隆选择。
Genovis的FabDELLO在铰链上方的单个位点消化人IgG1,并在两小时内生成均质的Fab和Fc片段(Genovis的IdeS在铰链区下方的单个位点进行消化)。生成的片段可用于结晶和高阶结构(HOS)的NMR研究、结合研究等。突变的铰链区域是zhiliao性候选抗体的常见修饰,以降低效应器功能。这些突变可能会影响具有高底物特异性的酶的抗体消化效率。例如,高度特异性的FabRICATOR(IdeS)消化效率对含有常见LALA突变的抗体产生负面影响。FabDELLO作用于人IgG1铰链上方的单个暴露赖氨酸残基,能够对具有突变铰链区域的抗体进行流行的中级LC-MS分析。例如,用FabDELLO消化市售的IgG1risankizumab,在下铰链区域具有LALA突变,并通过反相LC-MS进行分析。消化产生均匀的Fab和Fc片段。用20mMDTT还原片段,用于中级LC-MS分析,发现产生了均相的Fc/2、轻链(LC)和Fd片段。用FabDELLO消化后观察到的定义峰显示出均匀的片段生成和酶的稳健性能。
与IdeS不同,Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一种IgA1特异性酶,可在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1,而IgASAPSub1+2特异性消化铰链上方的IgA1和IgA2m1。两种酶都产生完整且均质的Fab和Fc片段。IgASAP酶能够生成完整的单价Fab片段以及IgA的中级分析,从而促进IgA的表征,例如,在疫苗、zhiliao和诊断的开发过程中。独特的酶促工具,可实现IgA的中级表征和质量控制;生成均相的Fab和Fc片段,并保留免疫反应性;高度特异性–人IgA铰链上方的一个消化位点。在大多数IgG上,您可以在短短30分钟内生成F(ab’)2和Fc/2片段。
在Genovis,我们的策略是帮助客户进行中级(或亚基)分析,这是我们的工作,特别是我们的蛋白质酶切产品。完整质量和肽图谱是蛋白质表征的常用方法,我们发现,与简单但信息有限的完整质量和高度复杂但信息丰富的肽图谱相比,中级方法具有优势。通过执行中级描述,您可以生成从完整的质量实验中获得的所有信息,具有额外的优势。在对抗体进行完整质量分析时,很难明确地识别某些修饰。质谱仪器正在改进,可以更有效地分析更大的分子,但通过使用我们的SmartEnzymes,如IdeS,可以将抗体分解成更小的片段,这提高了这些实验可以执行的分辨率,因此,增加了鉴定修饰的信心。此外,你不仅能够更好地识别修改,而且你能够将它们定位到蛋白质上的单个结构域,这是你在完整水平上无法做到的。可在重链中 CH2 结构域下方的一个特定位点消化人 IgM,产生均质的 F(ab')2 和 Fc 片段。河北GingisREXIdeS蛋白酶
铰链上方的单个暴露赖氨酸残基,生成的片段可用于结晶和高阶(HOS)NMR研究、结合研究等。陕西FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白组学
如果您想分析单克隆抗体或单克隆抗体分子,现在有了Genovis的一些新产品(IgA酶,IgM酶),其他的模式和分子形式(IdeS高通量的产品形式)来测定和监测许多不同的CQA,Genovis可以缓解使用不同分析方法时可能出现的瓶颈。 生产大量的样品当然很好,但如果分析团队不能足够快地处理它们,那就没有什么意义了。 高通量分析需要一致的、易于使用的方法,当然这些方法要快速,而且可能易于自动化。 这正是我们所能提供的,这使Genovis能够支持更多不同功能的客户。陕西FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白组学
与IdeS不同,在蛋白质zhiliao药物的质量控制过程中,详细分析和识别质量属性非常重要。对于具有...
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