网格蛋白介导的内吞途径呼吸道合胞病毒（RSV）是导致婴幼儿***的主要病毒病原体。研究表明，网格蛋白介导型内吞途径是目前研究得较为透彻且经典的病毒入胞途径。其中网格蛋白在此途径中的地位很重要。通过针对网格蛋白重链的小干扰RNA（siRNA）抑制网格蛋白的表达，可以有效的抑制RSV***Hela细胞。这提示网格蛋白介导的内吞途径在病毒感染细胞过程中发挥重要作用，同时也暗示了在某些情况下，RNA转染试剂可能利用这一途径进入细胞21。二、小窝蛋白介导的内吞途径在研究非病毒载体用于小干扰RNA（siRNA）递送时发现，将用组氨酸和半胱氨酸修饰的HIV-1Tat肽（mTat）与聚乙烯亚胺（PEI）结合，并与阳离子两亲脂质基试剂INTERFERin（INT）组合成的杂合载体（mTat/PEI/INT）能高效递送siRNA。研究表明，FilipinIII和β-环糊精（小窝蛋白介导的内吞作用抑制剂）能***抑制mTat/PEI/INT/siRNA转染，而氯丙嗪（网格蛋白介导的内吞作用抑制剂）则不能抑制mTat/PEI/INT/siRNA转染。此外，mTat/PEI/INT在4°C时的转染效率明显低于37°C。这些结果表明，mTat/PEI/INT作为一种潜在的有吸引力的非病毒载体用于siRNA递送，其转染过程可能是通过小窝蛋白介导且依赖温度的内吞途径实现的。核酸与转染试剂的比例对转染效率也有影响。浙江转染试剂动物实验
优化电转方法筛选**适电压和脉冲时间：不同细胞种类电转所需的**适电压和脉冲时间不同。例如，人成纤维细胞电转modRNA的**适电压为440V，**适脉冲时间为30ms；Hela、293T、3T3细胞电转**适电压分别为425V、400V、440V，**适脉冲时间均为30ms；人/兔外周血来源的悬浮的单个核细胞的**适电压分别为840V和860V，**适脉冲时间均为20ms。通过筛选**适电压和脉冲时间，可以提高RNA转染效率，同时证明了电转法转染modRNA进入细胞的可行性，且可同时将两种modRNA导入同一个细胞内6。RNA电穿孔高效转染原代淋巴细胞：使用体外转录的mRNA通过电穿孔可以实现高基因转染效率和低转染相关毒性。例如，在用GFP或mCD62L转染的受激原代人和鼠T淋巴细胞中观察到90％以上的转基因表达和80％以上的活细胞。GFPRNA对未刺激的人PBMC或鼠脾细胞进行电穿孔，分别产生95％和56％的GFP⁺细胞。此外，基因表达迅速且持久，对经过RNA电穿孔的T淋巴细胞未观察到不良影响7。湖南肝脏转染试剂在大肠杆菌细胞中复制的质粒通常含有二核苷酸频率为1:16的CpG基序，这与细菌DNA中的频率相似。
RNA转染试剂是一类能够将RNA分子导入细胞内的物质，其作用原理主要涉及以下几个方面。利用电荷相互作用：许多RNA转染试剂是阳离子性的，它们可以与带负电荷的RNA分子通过静电相互作用结合形成复合物。例如，鱼精蛋白是一种天然阳离子肽混合物，由于相反电荷驱动的耦合作用，被用于细胞内核酸的递送8。鱼精蛋白不仅可以保护RNA免受生物系统中的降解，还能增强其对细胞的穿透能力。阳离子脂质体也是常见的转染试剂之一。以LipofectamineTM2000为例，它可以介导携带绿色荧光蛋白基因的真核表达载体转染至鸡成骨细胞9。阳离子脂质体通过其阳离子头部与RNA的负电荷相互作用，形成脂质体-RNA复合物，然后通过与细胞膜的融合或内吞作用将RNA导入细胞内。内吞作用途径：一些RNA转染试剂通过内吞作用进入细胞。如合成的8-mer两亲性反式多聚2'-O-甲基尿苷硫代磷酸三酯RNA元件（2'-OMeUtaPS），它能介导将不带电荷的聚A尾磷酸二酰胺基吗啉代序列（PMO）高效递送至HeLapLuc705细胞或肌管肌肉细胞。已确定大胞饮作用是HeLapLuc705细胞中使用的主要内吞途径。
在鲤上皮瘤细胞中的应用在鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究时，转染试剂和DNA的剂量以及取样时间缺乏统一的数据支持。选取两种常用转染试剂Lipofectamine®2000和FuGENE®HD进行多配组转染试验，在28℃，以35mm培养皿铺板，16μLLipofectamine®2000和4μgDNA在转染后48h达到比较高转染效率(±)%；12μLFuGENE®HD和4μgDNA在转染72h后转染效率达到(±)%。通过构建鲤高不饱和脂肪酸合成相关转录因子过氧化物酶体增殖物***受体蛋白α（PPARα）的EGFP标签载体进行验证，两种转染试剂分别获得了约4%和约8%的转染效率，并对下游脂肪酸去饱和酶2（fads2）基因的转录调控效应进行检测，结果为后续利用鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究提供了数据支持5。在巨噬细胞中的应用商业转染试剂Lipofectamine已***用于核酸的细胞质递送和与细胞内先天免疫传感器进行细胞源啮合，以触发I型干扰素（IFN）生产。然而，单独对IIFN响应的脂质切积胺的影响尚未详细研究。研究表明，Lipofectamine诱导在原始，I型IFN诱导依赖于干扰素调节因子（IRF）3和IRF7，并且部分需要达洛/白细胞介素-1受体-含有结构域的适配器诱导的干扰素-β。相比之下，转染试剂XFECT未***IIFN信令6。 人类原代干细胞是另一种公认的难以转染的细胞类型，转染这种细胞类型的挑战仍然是效率低和细胞活力低。
脂质体转染是一种常用的将外源基因导入细胞的方法，脂质体大小：脂质体的大小也可能影响转染效率。较小的脂质体可能更容易进入细胞，但可能携带的 DNA 量较少。较大的脂质体可能携带更多的 DNA，但可能更难进入细胞。研究发现，阳离子脂质体的大小与转染效率之间存在一定的关系。随着脂质体尺寸的增加，转染的主要途径可能从网格蛋白介导的内吞作用转变为脂筏介导的内吞作用，同时也可能观察到巨胞饮作用。这种变化可能会影响脂质体在细胞内的运输和释放，从而影响转染效率。提高 RNA 转染效率是 RNA 研究领域中的重要课题。苏州转染试剂难转染
一项与抗血管生成基因传递高度相关的发现是，阳离子脂质体（CLs）选择性地靶向的血管系统。浙江转染试剂动物实验
优化转染条件MOI值对Lentivirus载体转染许旺细胞的影响：以Lentivirus三质粒系统构建病毒载体，在体外对原代大鼠许旺细胞进行转染，研究不同MOI值（***复数）对转染效率的影响32。结果显示，在病毒转染3天后，各不同MOI值的培养孔中开始出现少量荧光反应，第5天时荧光数量明显增多，第7天达到高峰，第9天与第7天变化不明显。从细胞转染效率来看，不同的MOI值效果不同，MOI值为5和10时转染效率较高。这表明在使用Lentivirus载体转染许旺细胞时，优化MOI值可以提高转染效率。同时，未提及该转染过程对细胞死亡的影响，但可以通过进一步的实验，如细胞活性检测等，来确定在提高转染效率的同时对细胞死亡的影响。浙江转染试剂动物实验
