鱼精蛋白作为RNA递送稳定剂具有重要作用,其具体作用机制主要包括以下几个方面:一、保护RNA免受降解鱼精蛋白是一种天然阳离子肽混合物,由于其带正电荷的特性,可以与带负电荷的RNA通过相反电荷驱动耦合23。在生物系统中,RNA很容易被RNase降解,而鱼精蛋白可以与RNA复合,形成稳定的复合物,从而保护RNA免受降解1213。例如,通过将单链RNA(ssRNA)与带正电荷的蛋白鱼精蛋白复合,可以稳定阴离子RNA1213。二、增强细胞穿透性鱼精蛋白不仅可以保护RNA,还能增强RNA的穿透细胞的能力。鱼精蛋白-RNA复合物的形成具有双重功能,一方面保护RNA不被降解,另一方面增强其穿透进入细胞的能力23。这种增强的细胞穿透性可能是由于鱼精蛋白的阳离子性质,使其能够与细胞膜相互作用,促进RNA的进入细胞2。转染试剂的冻融被认为是另一个可能影响转染效率的潜在因素。辽宁转染试剂定做
核细胞、关节软骨细胞、间充质干细胞(MSCs):选择两种合成转染试剂(阳离子脂质商业试剂LipofectamineRNAiMAX和聚乙烯亚胺(PEI))以及两种天然衍生转染试剂(多糖壳聚糖(98%脱乙酰化)和透明质酸(20%酰胺化)),用于将siRNA递送到包括髓核细胞、关节软骨细胞和间充质干细胞在内的原代间充质细胞中。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(***DH)作为内源性模型基因,在转染后第3天和第6天评估由20nM或200nMsiRNA引起的沉默程度。除了沉默效率外,还评估了细胞毒性、DNA含量变化和细胞分化潜能等非特异性影响。在四种转染试剂中,基于商业脂质体的试剂在20nMsiRNA时是**有效的siRNA递送试剂,其次是壳聚糖。使用阳离子脂质体、壳聚糖和PEI转染显示出不同程度的活力和DNA含量下降,这取决于所评估的siRNA剂量和细胞类型,但与***DH敲低无关。一些对DNA含量的影响并不伴随着活力的相应变化。然而,细胞周期抑制或进展的标记基因(如p21和PCNA)的表达变化不能解释DNA含量的变化。有趣的是,发现了***DH活性的非特异性上调,这***于软骨细胞15。肝*细胞HepG2和:比较两种人类细胞模型中两种转染剂,即基于脂质体的Lipofectamine™RNAiMAX和基于聚合物的GenMute™。 shRNA转染试剂价格阳离子 RNA 转染试剂在结合 RNA 分子机制上存在多种差异。
选择合适的转染试剂阳离子脂质体:如LipofectamineTM2000等阳离子脂质体是常用的转染试剂。通过优化转染条件,如转染前细胞融合度、质粒质量与脂质体体积比及转染时间等,可以提高转染效率。例如,在脂质体介导RNA干扰质粒转染鸡成骨细胞的试验中,当转染前细胞融合达到90%以上,质粒DNA与脂质体比例为1:2.5时转染效率比较高,并且在转染后48h转染效果比较好,对细胞的毒性作用较小4。二、利用天然阳离子肽混合物——鱼精蛋白作为稳定剂和增强剂:鱼精蛋白不仅可以作为肝素的中和药物和缓释胰岛素配方中的化合物,还可以用于核酸的细胞递送。自***作为转染增强剂使用以来,鱼精蛋白已被***用作RNA递送的稳定剂。它能保护RNA免受生物系统内的降解,并增强其对细胞的穿透能力。例如,鱼精蛋白稳定的RNA递送系统可以根据***目标进行调整,如与靶向抗体融合实现精确递送、消化成细胞穿透肽提高转染效率或与功能性聚合物非共价混合等。
脂质体转染是一种常用的基因转染方法,不同类型的细胞在脂质体转染过程中会表现出不同的特性和差异。以下是对脂质体转染对不同类型细胞影响差异的详细分析:
一、转染效率的差异宫颈*细胞:对于Hela细胞和Siha细胞,当细胞接种密度为每24孔板的每孔1.5×10⁴个细胞,miRNA量为1μl,Hela细胞中miRNA与脂质体比例为1:0.5,Siha细胞中为1:0.7时,24小时后可获得比较高转染效率1。与含血清的培养基相比,只有Siha细胞在无血清培养基中培养时,在转染前能获得更高的转染效率(P<0.01)1。PC12细胞:lipo2000转染PC12细胞的比较好转染条件为lipo2000用量为5μL,DNA2μg,转染时间为6h,这种条件下的PC12细胞转染率高达40%,且未影响细胞的正常分泌3。HepG2细胞:阳离子脂质体的扩散系数在lipoplex形成过程中与lipoplex的物理化学特性、lipoplex中质粒DNA的可及性以及每代谢活性的基因表达对数密切相关2。随着脂质体尺寸的增加,主要的内吞途径从网格蛋白介导的内吞转变为脂筏介导的内吞,此外,所有脂质体尺寸均观察到巨胞饮作用2。骨髓间充质干细胞:脂质体介导的CD基因在鼠骨髓间充质干细胞中成功表达,于转染48h后达峰值5。
RNA 转染试剂是一类能够将 RNA 分子导入细胞内的物质作用原理。
非人灵长类动物是神经科学研究的重要动物模型,超高场磁共振脑成像技术在非人灵长类动物研究中具有重要作用。非人灵长类动物超高场磁共振脑成像技术进展:徐斌、高阳、王菁综述了非人灵长类动物超高场磁共振脑成像应用、面临的技术挑战以及当前的技术解决方案等3。磁共振脑成像技术是目前**主要的非侵入式大脑神经信号探测手段,非人灵长类动物磁共振脑成像研究对于深入理解磁共振脑成像生理机制、研发定量生理探测技术、神经科学基础研究、心理学以及临床病理机制研究等都具有重要作用。但非人灵长类动物磁共振脑成像面临着缺少适配商用系统、需要更高成像分辨率以及对多样化动物实验需求兼容性等技术挑战。超高场磁共振具有高信噪比、高脑血氧水平依赖信号检测灵敏度和亚毫米级高分辨率成像能力等优势,有潜力应用于非人灵长类动物超高分辨率脑成像研究。基于病毒的转染,或者更具体地称为转导,涉及使用病毒载体将特定的核酸序列带入宿主细胞。安徽大鼠转染试剂
核酸与转染试剂的比例对转染效率也有影响。辽宁转染试剂定做
网格蛋白介导的内吞途径呼吸道合胞病毒(RSV)是导致婴幼儿***的主要病毒病原体。研究表明,网格蛋白介导型内吞途径是目前研究得较为透彻且经典的病毒入胞途径。其中网格蛋白在此途径中的地位很重要。通过针对网格蛋白重链的小干扰RNA(siRNA)抑制网格蛋白的表达,可以有效的抑制RSV***Hela细胞。这提示网格蛋白介导的内吞途径在病毒感染细胞过程中发挥重要作用,同时也暗示了在某些情况下,RNA转染试剂可能利用这一途径进入细胞21。二、小窝蛋白介导的内吞途径在研究非病毒载体用于小干扰RNA(siRNA)递送时发现,将用组氨酸和半胱氨酸修饰的HIV-1Tat肽(mTat)与聚乙烯亚胺(PEI)结合,并与阳离子两亲脂质基试剂INTERFERin(INT)组合成的杂合载体(mTat/PEI/INT)能高效递送siRNA。研究表明,FilipinIII和β-环糊精(小窝蛋白介导的内吞作用抑制剂)能***抑制mTat/PEI/INT/siRNA转染,而氯丙嗪(网格蛋白介导的内吞作用抑制剂)则不能抑制mTat/PEI/INT/siRNA转染。此外,mTat/PEI/INT在4°C时的转染效率明显低于37°C。这些结果表明,mTat/PEI/INT作为一种潜在的有吸引力的非病毒载体用于siRNA递送,其转染过程可能是通过小窝蛋白介导且依赖温度的内吞途径实现的。辽宁转染试剂定做