电转染方式：机制概述：电转染是利用电场作用使细胞膜产生可逆性的通透性增加，从而使RNA分子能够进入细胞。在适当的电场条件下，细胞膜上会形成微孔，RNA分子通过这些微孔进入细胞。当电场消失后，细胞膜会逐渐恢复正常状态。在不同细胞类型中的表现：在人脂肪干细胞（hADSC）中，Optimization6电转方式转染hADSC的效率高于其他电转染方式（Optimization4）和脂质体转染试剂RNAiMAX。荧光显微镜观察及流式分析均表明电转染方式的蛋白表达优于RNAiMAX脂质体转染。这说明电转染方式在hADSC中能够更有效地将modRNA转染入细胞，并实现特定蛋白的表达10。鱼精蛋白相关转染试剂：机制概述：鱼精蛋白是一种天然阳离子肽混合物，可用于稳定和递送核酸，包括信使RNA（mRNA）等。当与RNA混合时，鱼精蛋白会自发地产生粒径在20-1000nm范围内的颗粒，这些颗粒可用于疫苗接种和免疫刺激。不同等级的鱼精蛋白在与mRNA形成复合物时表现出不同的转染能力，其转染机制可能与鱼精蛋白的来源等因素有关。在不同细胞类型中的表现：鱼精蛋白相关转染试剂在多种细胞类型中的具体表现目前文献中未详细提及，但研究表明不同来源的鱼精蛋白制剂在其组成和转染mRNA的能力上存在很大差异。研究人员集中研究了将合成t细胞免疫原作为DNA疫苗使用的方法。黑龙江转染试剂动物实验
对于容易转染的贴壁细胞如人胚肾细胞（HEK293）和人宫颈*细胞（HeLa），脂质体转染效率相对较高。这些细胞具有较强的内吞能力，能够有效地摄取脂质体-核酸复合物。例如，在标准的转染条件下，HEK293细胞的转染效率可以达到50%-70%。而对于一些难转染的贴壁细胞，如原代肝细胞和某些神经细胞，其转染效率较低。这是因为它们的细胞膜结构比较复杂，可能存在较厚的糖萼或者紧密的细胞间连接，阻碍了脂质体-核酸复合物的进入。例如，原代肝细胞的转染效率可能只有10%-20%。
一般来说，贴壁细胞对脂质体的耐受性相对较好。但是，在高浓度脂质体转染的情况下，即使是耐受性好的细胞也会受到影响。例如，HeLa细胞在高浓度脂质体转染时，可能会出现细胞膜完整性受损，表现为细胞内乳酸脱氢酶（LDH）释放增加，细胞的代谢活动也会受到一定程度的干扰。对于难转染的贴壁细胞，由于其本身比较脆弱，较低浓度的脂质体也可能产生明显的细胞毒性。比如原代神经细胞，脂质体可能会破坏其精细的神经突起结构，影响细胞的正常生理功能。 黑龙江转染试剂动物实验评估转染效率至关重要，特别是在需要高转染效率以保证特定下游靶标转录后调控的功能研究中。
对细胞活力的影响：一些研究表明，在阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导下鸡TRPV6基因RNA干扰（RNAi）质粒转染入成骨细胞的实验中，当转染前细胞融合达到90％以上，质粒DNA与脂质体比例为1:2.5时转染效率比较高，并且在转染后48h转染效果比较好，对细胞的毒性作用较小3。在人肝瘤两种细胞模型中，通过比较LipofectamineRnaimax和Genmute转染剂发现，用基因***的细胞呈现荧光阴性对照siRNA的更高摄取，并且观察到与基因转染的细胞相对于脂质积rnaimax的细胞具有较高的活力6。有研究使用两种常见的RNA干扰（RNAi）转染试剂DharmaFECT1和INTERFERin，在模拟转染中使用非靶向siRNAs，结果表明这些试剂会引起HeLa细胞脂质组的变化，但功能影响仍有待研究，这也暗示在RNAi实验中使用适当的模拟转染对照非常重要。
准确控制脂质体与核酸的比例是关键。通过实验确定比较好的脂质体 - 核酸复合物比例，一般可以进行梯度实验，从较低比例开始逐步增加，观察转染效率的变化。例如，不同类型的细胞对脂质体和 RNA 或 DNA 的比例要求不同，像在转染 HEK293 细胞时，可能 1:3（脂质体：核酸）的比例比较合适，而对于较难转染的原代细胞，可能需要适当增加脂质体的用量。
不同配方的脂质体在转染效率上有差异。根据细胞类型和实验目的选择合适的脂质体试剂。例如，一些脂质体含有特殊的功能成分，如靶向基团可以增强与特定细胞的结合，或者具有促进内吞体逃逸的成分，从而提高转染效率。新型的脂质体制剂不断涌现，如含有可电离阳离子脂质的脂质体，在生理 pH 条件下呈电中性，减少与血清蛋白的相互作用，进入酸性的内体后带正电，更有利于与内体膜融合，释放核酸，在提高转染效率的同时降低细胞毒性。 核酸与转染试剂的比例对转染效率也有影响。
靶向特定基因座提高稳定转染效率：在布鲁氏锥虫中，利用RNAi的构建体和（GFP）标记的蛋白的表达，靶向（hyg）标记的核糖体RNA（RRNA）基因座，可以规避位置效应并提高靶向效率。该系统还利用新的诱导型RRNA启动子来驱动T7RNA聚合酶（T7RNAP）转录，然后从诱导型T7启动子驱动表达，可减轻当前表达系统的一些问题9。综上所述，提高RNA转染效率的策略包括选择合适的转染试剂、利用鱼精蛋白、优化电转方法、采用RNA电穿孔、优化共转染方法以及靶向特定基因座等。这些策略可以根据不同的实验需求和细胞类型进行选择和组合，以提高RNA转染效率，为RNA研究和应用提供有力支持。作为一般指导原则，建议使用早期传代的细胞以获得良好的转染效率，特别是涉及原代或干细胞的转染。上海转染试剂定制
提高 RNA 转染试剂的转染效率同时降低细胞死亡。黑龙江转染试剂动物实验
二、影响因素的差异细胞接种密度：不同类型的细胞在比较好转染效率下的细胞接种密度不同。例如，宫颈*细胞Hela和Siha的比较好接种密度为每24孔板的每孔1.5×10⁴个细胞1，而研究中Caco-2细胞的比较好接种密度为2×10⁵9。DNA用量：各种细胞所需的DNA用量也存在差异。如PC12细胞转染的比较好DNA用量为2μg3，而Caco-2细胞转染时比较好DNA用量为4μg9。脂质体与DNA的比例：不同细胞类型对应的比较好脂质体与DNA的比例不同。Hela细胞中miRNA与脂质体比例为1:0.5，Siha细胞中为1:0.71；Caco-2细胞转染时比较好脂质体与DNA比例为2.5:19。复合物形成时间和孵育时间：不同细胞类型对脂质体-DNA复合物的形成时间和细胞与复合物的孵育时间要求不同。例如，Hela和Siha细胞未明确提及复合物形成时间和孵育时间，而Caco-2细胞的比较好脂质体-DNA复合物形成时间为30min，细胞与复合物孵育时间为6h9。黑龙江转染试剂动物实验
