中国雨季非洲猪瘟检测技术

    几种非洲猪瘟病毒蛋白具有高度抗原性，包括病毒衣壳的主要结构成分（p72），以及膜蛋白p54、p30和p12。总共超过50种病毒蛋白可在耐过或康复猪中诱导可检测的抗体反应。虽然作为血清学诊断中的抗原很有用，但它们在诱导保护性免疫中的作用尚不清楚，因为非洲猪瘟病毒不诱导完全的中和抗体免疫反应。非洲猪瘟病毒粒子在无血清培养基中pH4-10时保持稳定，但在pH低于4或高于。血液中的粒子在5°C(41°F)下可保持复制性6年，在含25%血清的培养基中pH下可保持数天复制能力。病毒粒子可通过60°C(140°F)加热30分钟或56°C(133°F)加热70分钟灭活。许多有机溶剂通过破坏脂质包膜使病毒失活，但非洲猪瘟病毒对蛋白酶和核酸酶具有抗性。非洲猪瘟病毒田间分离株的回收必须在原代猪单核细胞/巨噬细胞中进行，因为田间毒株在常规细胞培养系统中复制不佳。出于研究目的，几种非洲猪瘟病毒分离株已适应在非洲绿猴肾稳定细胞系（包括VERO、MS和CV-1细胞）或野猪肺细胞中生长。近期，几种单核细胞来源的猪细胞系已被开发用于研究目的。尽管该领域取得了进展，细胞系仍然是疫苗病毒生产的限制因素。 八方同创提醒：非洲猪瘟病毒可利用气溶胶、灰尘等载体，通过大风短距离传播。中国雨季非洲猪瘟检测技术

八方同创深耕并致力于猪场非洲猪瘟防控的经历提醒猪场，非洲猪瘟的亚急性型症状（多见于流行地区）在非洲猪瘟流行地区，可能出现自然减毒的病毒株，引发的病例呈现年龄相关性。初期症状同样为发热，伴随活动量减少、采食量下降，怀孕母猪也可能流产。但大部分病猪可完全康复，且多数情况下会随时间推移彻底排除病毒。临床症状持续1-2周后逐渐减轻并消失，致死率在10%-60%之间。部分情况下，成年猪的症状更严重、致死风险更高。这一特征与古典猪瘟（CSF）不同：中等毒力古典猪瘟病毒株时，幼龄猪的症状更为严重。马来西亚母育猪非洲猪瘟生物安全要点非洲猪瘟病毒弱毒株具有明显的间歇性排毒特点，口鼻拭子采样很难捕抓到病毒，建议增加环境和尾根血采样。

非洲猪瘟抗体作用的比较好证据是证明了被动转移免疫血清后对非洲猪瘟病毒的部分保护。迄今为止的研究尚未鉴定出保护性抗原，针对免疫显性衣壳和其他结构蛋白的抗体可能具有中和活性，但不足以提供保护。另一方面，红细胞吸附介导的病毒CD2v（EP402R）和/或C型凝集素（EP153R）被证明与保护有关。这可能部分由抗体介导，因为这两种蛋白相对可变并定义了影响交叉保护的血清型。因此，一项较早的研究表明，红细胞吸附抑制抗体可与保护相关，这些蛋白免疫原性较差。

为了理解抗体对保护性免疫的贡献，了解它们的功能性抗病毒活性至关重要。在此背景下，注意到抗体中和非洲猪瘟病毒的效力与大多数其他病毒相比相当有限，并且由于文献中信息矛盾，且抗体功能与保护相关的证据不足，这仍是一个有争议的话题。作为替代的抗体功能，补体依赖性抗体介导的细胞毒性或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性已被探索，但尚未被确认或确定为保护相关物。

八方同创深耕并致力于猪场非洲猪瘟防控的经历提醒猪场，近期的研究再次表明，ASFV在4℃、22℃和40℃时稳定，在EMEM中培养24h后，损失不到10个50%血细胞吸附剂量（HAD50）/mL。组织中的ASFV可以在深度冷冻（-70℃）条件下存活多年而没有明显的滴度损失，但在20℃时会逐渐失去活性，但仍可存活至少105周。在4℃时，病毒在培养基中非常稳定，至少在61周内保持活性。在较高温度下，ASFV失活相对较快，在37℃下，ASFV在细胞培养基中可保持活性11~22d，但在50℃时，只有少部分病毒保持活性，而在60℃时，15min后就检测不到活毒粒子。猪群发现不吃料猪只，及时采样，建议采猪栏的环境拭子和口鼻拭子，进行PCR检测，排除非洲猪瘟病毒。

八方同创深耕并致力于猪场非洲猪瘟防控的经历提醒猪场，不同非洲猪瘟毒株有不同的流行特点。野毒株流行特点：高度接触传播，死亡快，死亡率达30-100%，供料不食，死亡，流产，皮肤发红、黄、白，血便等临床症状；唾液，血液拭子均能检测到抗原（P72荧光定量PCR）；抗体检测早12天可以检测到，30天左右阳性达高峰，可持续5-8个月；变异毒株流行特点：接触传播、有限空气传播，死亡慢，死亡率0-50%，厌食、死亡、关节肿、皮肤坏死等症状，临床症状不明显；间断性排毒，拭子抗原难以检测到(需要P72/MGF/CD2V三重荧光定量PCR)；抗体检测21天可检测到，45-50天左右阳性率达高峰；持续2个月或更短；潜伏+应激可导致爆发；可以通过模糊拔牙、净化种猪、稳定商品猪生产；八方同创提醒：病毒可在冷冻肉中存活数年，因此，猪肉及制品严禁进入猪场。印度尼西亚养殖场非洲猪瘟托管

八方同创要求非洲猪瘟阳性场，做好内防扩散措施，动猪必检（只转移低风险的阴性猪）。中国雨季非洲猪瘟检测技术

    从1G到6G——“拔牙”技术的持续进化猪场一旦发现非洲猪瘟，减少损失的措施就是通过临床观察和诊断确诊进行“选择性淘汰——我们通常称之为拔牙”。自2019年起，八方同创便专注于阳性猪“拔牙”，根据非洲猪瘟病毒不同的流行特点，自创从初代（1G）依靠临床观察非洲猪瘟典型症状淘汰阳性猪，到第二代技术(2G)结合临床症状和口鼻拭子的PCR检测进行淘汰阳性猪，到第三代（3G）技术体系，就是在2G基础上增加尾根血拭子，淘汰阳性猪；第四代技术（4G）增加抗体检测；随着非洲猪瘟病毒的毒力弱化，第五代（5G）技术体系，增加了主动应急技术和两次抗体检测，确保耐过猪被淘汰；第六代（6G）技术增加非洲猪瘟病毒的鉴别诊断技术，根据病毒传播特点、毒力强弱、抗体消长规律确定拔牙方案。八方同创的拔牙技术体系是根据非洲猪瘟病毒临床症状、流行特点、传播路径、病毒血症和抗体消长规律进行研发与迭代。该技术体系从依靠临床症状的1G阶段，逐步发展到融合现场快速检测与多重PCR测序的6G技术。每一次升级都针对病毒变异与防控难点，实现了更快速的检测、更早期的识别和更准确的淘汰，帮助猪场减少损失，体现了公司与时俱进的技术创新能力。 中国雨季非洲猪瘟检测技术

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